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85493
ULK1 Substrate Antibody Sampler Kit
一抗

ULK1 Substrate Antibody Sampler Kit #85493

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使用 Phospho-Atg14 (Ser29) (D4B8M) Rabbit mAb(绿色)对未经(左图,低表达)或经 Torin 1 #14379(250 nM,2 小时;中间-左图,高表达)处理的 HCT 116 Atg14 野生型细胞、经 Torin 1(中间-右图,阴性)处理的 HCT 116/Atg14 shRNA 敲除型细胞或经 λ-磷酸酶(2 小时,右图,阴性)进行后处理的 HCT 116 Atg14 野生型细胞进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。HCT 116/Atg14 shRNA 敲除型细胞由明尼苏达州明尼阿波利斯明尼苏达大学的 Do-Hyung Kim 博士惠赠。

对 HCT 116 细胞提取物 Atg14 进行免疫沉淀法分析。泳道 1 为 10% 输入,泳道 2 用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 沉淀,泳道 3 为 Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb。使用 Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。构象特异性二抗用于避免与 IgG 发生反应。

使用 Phospho-Beclin-1 (Ser15) (D4B7R) Rabbit mAb (上图)、Beclin-1 (D40C5) Rabbit mAb #3495 (中图) 或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下图),对转染空载 (-) 或转染表达全长人 Beclin-1 蛋白 (hBeclin-1; +)、小鼠 Beclin-1 蛋白 (mBeclin-1; +) 或小鼠 ULK1 蛋白 (mULK1; +) 的表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 Beclin-1 (D40C5) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

对经汉克平衡盐溶液 (HBSS) 饥饿处理(2 小时)的 PANC-1 细胞提取物磷酸 Atg13 (Ser355) 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Phospho-Atg13 (Ser355) (D6J1W) Rabbit mAb。使用 Phospho-Atg13 (Ser355) (D6J1W) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。

使用 Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb 对 RD、PANC-1 和 A20 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 ULK1 (D8H5) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 Phospho-ULK1 (Ser757) (D7O6U) 兔单克隆抗体对未经处理(左图)、未经处理后再经 λ-磷酸酶处理(中图)或经 Torin 1 #14379(250 nM,5 小时;右图)处理的 MCF7 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色 = Hoechst 33342 #4082(DNA 荧光染料)。

使用 Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb 对未处理的或经 oligomycin #9996(0.5 μM,持续30 分钟)处理的 MCF7 细胞提取物,以及未处理的或经过氧化氢(10 mM,持续5分钟)处理的 C2C12 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 Phospho-Atg14 (Ser29) (D4B8M) Rabbit mAb(上图)、Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对转染空载 (-) 或转染表达带有 GFP 标签的人 Atg14 蛋白 (hAtg14-GFP; +) 或小鼠 ULK1 蛋白 (mULK1; +) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白印迹分析。

使用 Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb(上)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #84576(下)对 HCT 116 和 HCT 116/Atg14 shRNA 敲除型细胞提取物进行蛋白质印迹分析。HCT 116/Atg14 shRNA 细胞由 University of Minnesota, Minneapolis, MN Do-Hyung Kim 博士友情提供。

使用 Beclin-1 (D40C5) XP® Rabbit mAb #3495(上)或 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125(下)对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-)、SignalSilence® Beclin-1 siRNA I #6222 (+) 或 SignalSilence® Beclin-1 siRNA II (+) 转染的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Beclin-1 (D40C5) XP® Rabbit mAb 可确认 Beclin-1 的表达沉默,而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 则用作观察上样量和 Beclin-1 siRNA 的特异性。

使用 Phospho-Atg13 (Ser355) (D6J1W) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或转染表达带有 Myc/DDK 标记的全长人 Atg13 (hAtg13-Myc/DDK; +) 或小鼠 ULK1 (mULK1; +) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb(上)或 Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278(下)对转染空载 (-) 或转染 Myc/DDK 标记人全长 Atg13 表达载体 (hAtg13-Myc/DDK; +) 的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 ULK1 (D8H5) Rabbit mAb(上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对野生型 MEF 和 ULK1 (-/-) MEF 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。MEF 细胞由 Reuben Shaw 博士 (Salk Institute, La Jolla, CA) 惠赠。

使用 Phospho-ULK1 (Ser757) (D7O6U) Rabbit mAb(上图)或 ULK1 (D8H5) Rabbit mAb #8054(下图)对未处理的 (-) 或经 mTOR 抑制剂( Torin-1(250 nM,持续5 小时),Torin-2(250 nM,持续5 小时),或 INK128(250 nM,持续5 小时))处理的 A172 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb(左图)对未处理的或经 oligomycin #9996(0.5 µM,持续30 分钟)处理的 MCF7 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。使用磷酸化(中间图)或在 ULK1 的 Ser555 周围区域的非磷酸化肽(右图)来预孵育抗体,从而证实磷酸化的特异性。

使用 Phospho-Atg14 (Ser29) (D4B8M) Rabbit mAb(上图)、Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb #96752(中间)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb(下图),对未经处理 (-) 或用 Earle's Balanced Salt Solution(EBSS,2 小时;+)和 ULK1 抑制剂 SBI-0206965 #29089(50 μM,2 小时;+)(如图所示)饥饿的 HCT 116 和 HCT 116/Atg14 shRNA 敲除型细胞的提取物进行蛋白印迹分析。HCT 116/Atg14 shRNA 敲除型细胞由明尼苏达州明尼阿波利斯明尼苏达大学的 Do-Hyung Kim 博士惠赠。

使用 Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb(上)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下)对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-) 或 SignalSilence® Atg13 siRNA I #12043 (+) 转染的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb 可确认 Atg13 的表达沉默,而 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb 则用作上样对照。

使用 Phospho-ULK1 (Ser757) (D7O6U) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb(上图)或 ULK1 (D8H5) Rabbit mAb #8054(下图)对未处理的 (-) 或经羰基氰化物3-氯苯腙(CCCP)(100 μM,持续2 小时; +)处理的 MCF7 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 Phospho-Atg14 (Ser29) (D4B8M) Rabbit mAb(上图)、Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb #96752(中图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对未经 (-) 或已经 λ-磷酸酶和牛小肠磷酸酶(λ-磷酸酶/CIP ;+) 处理的 HCT 116 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。

使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype control #3900(泳道 2)或 Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb(泳道 3)对 RD 细胞提取物 Atg13 进行免疫沉淀法分析。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。

使用 Phospho-Atg14 (Ser29) (D4B8M) Rabbit mAb(上图)、Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb #96752(中间)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对未经处理 (-) 或用 Earle's Balanced Salt Solution(EBSS,2 小时)饥饿的 Saos-2 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。

购买 # 85493T
产品货号 规格 价格 库存
85493T
1 个试剂盒(9 x 20 µl)

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
Phospho-Atg14 (Ser29) (D4B8M) Rabbit mAb 92340 20 µl
  • WB
  • IF
H M R 65 兔 IgG
Atg14 (D1A1N) Rabbit mAb 96752 20 µl
  • WB
  • IP
H M R 65 兔 IgG
Phospho-Beclin-1 (Ser15) (D4B7R) Rabbit mAb 84966 20 µl
  • WB
H M 60 兔 IgG
Beclin-1 (D40C5) Rabbit mAb 3495 20 µl
  • WB
  • IP
H M R Mk 60 兔 IgG
Phospho-Atg13 (Ser355) (D6J1W) Rabbit mAb 26839 20 µl
  • WB
  • IP
H 72 兔 IgG
Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb 13273 20 µl
  • WB
  • IP
H M R 72 兔 IgG
ULK1 (D8H5) Rabbit mAb 8054 20 µl
  • WB
  • IP
H M R Mk 150 兔 IgG
Phospho-ULK1 (Ser757) (D7O6U) Rabbit mAb 14202 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
H M R Mk 140-150 兔 IgG
Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb 5869 20 µl
  • WB
  • IP
H M 140-150 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
山羊 

产品说明

ULK1 Substrate Antibody Sampler Kit 是一种经济合算的方法,可使用磷酸化特异性和对照抗体检测 ULK1 活性。该试剂盒含有足量的一抗,每种一抗可进行 2 次蛋白质印迹实验。

特异性/敏感性

Phospho-Beclin-1 (Ser15) (D4B7R) Rabbit mAb 和 Phospho-Atg13 (Ser555) (E6H1W) Rabbit mAb 只建议用来检测其转染水平的特异性靶标。Phospho-Atg13 (Ser555) (E6H1W) Rabbit mAb 可微弱地检测内源水平的磷酸化 Atg13 ,但也会与一条 25 kDa 的未知条带产生反应。该试剂盒中的所有其他抗体均可检测其内源水平的特异性靶标。Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb 可检测一条介于 90和 100 kDa 之间的未知条带。

来源/纯化

使用与人 Atg14 的 Arg70、人 Beclin-1 的 Thr72、人 Atg13 的 Asp462 和人 ULK1 的 Arg600 周围残基相对应的合成肽,对兔进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与 Atg14 的 Ser29、人 Beclin-1 的 Ser15、人 Atg13 的 Ser355(Atg13 同工型 2 的 Ser318)、小鼠 ULK1 的 Ser555(相当于人 ULK1 的 Ser556)及小鼠 ULK1 的 Ser757(相当于人 ULK1 的 Ser758)相对应的合成磷酸肽,对兔进行免疫接种来产生磷酸化特异性单克隆抗体。

背景

两种有关的丝氨酸/苏氨酸激酶类 UNC-51-激酶 1 和 2 (ULK1, ULK2) 被发现是秀丽隐杆线虫基因 UNC-51 的哺乳动物同源物,其中突变体表现出异常的轴突延伸和生长 (1-4)。两种蛋白均广泛表达,并且包含一个后跟一个中央脯氨酸/丝氨酸富集结构域的氨基末端激酶结构域以及一个高度保守的羧基末端结构域。ULK1 和 ULK2 在轴突生长中的作用与有关研究相关,这些研究表明激酶位于神经元生长锥,并且与 NGF 等关键生长因子的内吞有关 (5)。酵母双杂交研究发现,ULK1/2 能结合内吞通路的调节物,如 SynGAP 和 syntenin (6)。使用酵母自噬蛋白 Atg1/Apg1 还可识别 ULK1/2 的结构相似性 (7)。使用 siRNA 的敲除实验表明,ULK1 对自噬非常重要 (8),自噬是一种降解大量细胞浆内含物的分解代谢过程 (9,10)。Atg1/ULK1 似乎能够作为控制自噬的多重信号聚焦点 (11),并且能结合许多自噬相关 (Atg) 蛋白,从而调节磷酸化状态和蛋白转运 (12-16)。

在营养不足的情况下被激活的 AMPK 会在多个位点磷酸化 ULK1,包括 Ser317、Ser555 和 Ser777 (17,18)。相反,作为细胞生长调节分子和自噬抑制剂的 mTOR 可以磷酸化 Ser757 位点上的 ULK1 ,并破坏 ULK1 和 AMPK 之间的相互作用 (17)。ULK1 经证实会在自噬通路中磷酸化多个靶标,包括 Atg14 的 Ser29、Beclin-1 的 Ser15 和 Atg13 的 Ser355 (19-22)。

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  21. Kim, J. et al. (2011) Nat Cell Biol 13, 132-41.
  22. Egan, D.F. et al. (2011) Science 331, 456-61.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。

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