流式细胞法检测免疫信号转导和表型靶标的实验步骤兼容性表

本实验步骤兼容性表标识了与通用实验步骤协作的表面和细胞内抗体。在页面底部的文本中找到有关内容和导航表格的其他详细信息。

抗体克隆信息和实验步骤兼容性测试

抗体克隆信息			实验步骤兼容测试				可用偶联物（荧光素名称上方列出发射光谱（nm））
							紫色激光		蓝色激光							红色激光
			实验步骤				450	455	520	520	578	667	678	695	785	660	668	710	719
抗体	Epitope Location	物种反应性	SourceLive	Fix, Meth Perm	Fix, Triton Perm	FoxP3 Fix Perm	Violet Fluor 450	Pacific Blue™	FITC	Alexa Fluor^® 488	PE	PE-Cy^®5	PerCP	PerCP-Cy^®5.5	PE-Cy^®7	APC	Alexa Fluor^® 647	red Fluor 710	Alexa Fluor^® 700
Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4)	IC	H, M, R, Mk, Dm								2846	7547						5123
Aiolos (D1C1E)	IC	H, M								94568	21799						10896		59612
Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb	IC	H, M, R								2336							2337
Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb	IC	H、M、R、Hm、Mk、Dm、Z、B								4071	5315				88106	11962	4075
Phospho-Akt (Thr308) (D25E6)	IC	H、M、R、Mk								43506	13842						48646
BCL6 (D4I2V)	IC	H								26556	84882						41194
Bcl-xL (54H6)	IC	H、M、R、Mk								2767	13835				81965	12099	86387
Cleaved Caspase-3 (Asp175) (D3E9)	IC	H, M						8788		9603	12768						9602
CD3 (17A2)	EC	M					38527		86603		28306					24265		26582
CD3 (UCHT1)	EC	H					61347		86774		46233			31767	62670	19881		44330
CD4 (RM4-5)	EC	M					92599		96127		26589			49482	38341	82116		75508
CD4 (RPA-T4)	EC	H					26755		48705		55927			46699	66182	78292
CD8α (2.43)	EC	M					17083		35467		56984			72461	87922	64786
CD8α (RPA-T8)	EC	H					25109		55397		88829			75003	27442	64915		86135
CD11b/ITGAM (M1/70)	EC	H, M					70078		24442		24965	16538		85601		41249		55274
CD11c (3.9)	EC	H					97473		69627		56025				80342	36268		42847
CD11c (N418) Hamster mAb	EC
CD14 (61D3)	EC	H					82944		29943		59896			99811	44947	36377		64342
CD16 (3G8)	EC	H									82004				23290
CD19 (1D3)	EC	M					54508		53343		82168			43145	27221	39831		72880
CD19（细胞内结构域） (D4V4B)	IC	H, M								70418	58960						16344
CD20 (2H7)	EC	H					88560		87491		26137			72374	50665	69077		38268
CD24 (M1/69)	EC	M					9705				90378					68390
CD25/IL2-Rα (BC96)	EC	H													43212	20164
CD27 (O323)	EC	H					70511		35379		55584				66120	42404
CD28 (CD28.2)	EC	H							15666		27826			25544	82076	73906
CD34 (ICO115) Mouse mAb	EC	H									79253
CD38 (HIT2)	EC	H					24713		90005		90775			10284		73977
CD44 (IM7)	EC	H, M					53289		75122		88151	94170		38200	43675	80813		63882
CD45 (30-F11)	EC	M					83090		62307		47742				60943	41104		99856
CD45 (HI30)	EC	H					74292		86532		89492			32125	28418	98228		39170
CD45RA (HI100)	EC	H					72177		23672		96979			78564	37558	97321
CD45R/B220 (RA3-6B2)	EC	H, M					67084		34399		93992	16935		17299	82922	98126		82984
CD56/NCAM1 (MY31)	EC	H							67184		73521				42804	51997
CD62L/L-Selectin (MEL-14)	EC	M							76378		32908			90088	61885	46592		60310
Phospho-CD79A (Tyr182) (D1B9)	IC	H								52821	14948						29742
CD68 (D4B9C)	EC	H								24850	79594
CD69 (H1.2F3) Hamster mAb	EC	M
CD71 (D7G9X) XP® Rabbit mAb	EC	H									82582
CD74 (D5N3I) XP® Rabbit mAb	EC	H								99916	55084
CD86/B7-2 (GL-1)	EC	M							99879		60712				11527	84393
CD161/NK1.1 (PK136)	EC	M							28486		45378			88957	78652	35986		19809
CD161/KLRB1 (HP-3G10)	EC	H					26540		67086		83130			26217		51113
Phospho-CREB (Ser133) (87G3)	IC	H, M, R								9187	14228						14001
Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb	IC	H, M, R								9187	14228						14001
CTLA-4 (D4E9I)	EC	H								15162	15132
EOMES (D8D1R)	IC	H									17984						42582
FoxP3 (3G3)	IC	M									65210				10680	41442
F4/80 (BM8.1)	EC	M					40781		52267		64763			88154	80380	86007		94009
GATA-3 (D13C9)	IC	H, M									13411
Granzyme B (D2H2F)	IC	H, M								33359	65563						50590
Helios (D8W4X)	IC	H, M								56424	29360						65432
Phospho-Histone H2A.X (Ser139) (20E3)	IC	H、M、R、Mk								9719	5763						9720
Histone H3 (D1H2)	IC	H、M、R、Mk						12167			82241						12230
Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8)	IC	H, M, R, Mk, Z						8552		3465	5764						3458
Acetyl-Histone H3 (Lys9) (C5B11)	IC	H, M, R, Mk, Z						11857		9683	28036						4484
Tri-Methyl-Histone H3 (Lys27) (C36B11)	IC	H、M、R、Mk								5499	40724						12158
Tri-Methyl-Histone H3 (Lys36) (D5A7)	IC	H、M、R、Mk									46287
Tri-Methyl-Histone H3 (Lys4) (C42D8)	IC	H, M, R, Mk, Dm, Sc															12064
HLA-DR (L243)	EC	H							54126		78397		17634					46861
Ikaros (D6N9Y)	IC	H, M								89389	33462						15740
IκBα (L35A5)	IC	H, M, R, Mk, B, Pg						13656		5743	7523
Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M)	IC	H, M, R								53539	83611
Phospho-IRF-3 (Ser386) (E7J8G) XP® Rabbit mAb	IC	H
LAG3 (E3E9B) Rabbit mAb	EC	M								72276
Ly-6G (1A8) Rat mAb
MHC Class II (I-A/I-E) (M5/114.15.2)	EC	M					86628		42594		67762			16114		64776		29097
Phospho-NF-kB p65 (Ser536) (93H1)	IC	H, M, R, Hm, Mk, Pg								4886	5733						4887
Nur77 (D63C5)	IC	H									59999
Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2)	IC	H, M, R, Mk, Mi, Dm, Z, Pg						14196		13214	14095				98168	33370	13148		15892
Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (E10) Mouse mAb	IC	H, M, R, Mk, Mi, Dm, Z, Pg								4374							4375
Cleaved PARP (Asp214) (D64E10)	IC	H、Mk								9148	8978						6987
Phospho-PLCγ1 (Tyr783) (D6M9S)	IC	H, M								25678	14461						88717
Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E)	IC	H, M, R, Mk, Mi, Sc						8520		4803	5316				34411	14733	4851		27036
Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb	IC	H、M、R、Mk								5018	14236						5044
Phospho-SLP-76 (Ser376) (D7S1K)	IC	H						83768		90247	16318						40887
Phospho-SLP-76 (Ser376) (E3G9U) XP® Rabbit mAb	IC	H, M
Phospho-Stat1 (Tyr701) (58D6)	IC	H, M								9174	8062						8009
Phospho-Stat2 (Tyr690) (D3P2P)	IC	H, R								68826	77366						90740
Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7)	IC	H、M、R、Mk								4323	8119						4324
Phospho-Stat3 (Ser727) (D4X3C)	IC	H								58978	87544						71958
Phospho-Stat4 (Tyr693) (D2E4)	IC	H									13223
Phospho-Stat5 (Tyr694) (C71E5)	IC	H, M								3939	5387						9365
Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7)	IC	H, M									14603
Phospho-Stat6 (Tyr641) (D8S9Y)	IC	H, M									99902						10205
Phospho-STING (Ser365) (D1C4T)	IC	M
Phospho-STING (Ser366) (D8K6H)	IC	H								41622							43499
Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1)	IC	H								4349	6485						12081
Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2)	IC	H, M								14586	13498						14590
T-bet/TBX21 (D6N8B)	IC	H								14298							14307
TCF1/TCF7 (C63D9)	IC	H, M						9066		6444	14456						6709
TNF-α (D2D4)	IC	M								87509
Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) (65E4)	IC	H, M								73382	14791						82975

表格关键信息： IC: 细胞内 EC：胞外建议性能降低不建议未测试

物种反应性缩写：H—人类 M— 小鼠 R—大鼠 MK—猴子 B— 牛 PG—猪 Mi—水貂 DM—黑腹果蝇 Z—斑马鱼 SC—酿酒酵母

实验步骤概述

实验步骤编号	实验步骤信息	染色制备简介	可用的固定透化试剂盒
1	活细胞表面染色实验步骤	染色前无细胞固定或透化的实验步骤	不适用
2	固定细胞内染色 – 甲醇透化实验步骤	在染色前使用甲醛和甲醇固定和透化细胞	Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593
3	固定细胞内染色 – TRITON™ X-100 透化实验步骤	在染色前使用甲醛和 TRITON™ X-100 进行细胞固定和透化	Intracellular Flow Cytometry Kit (Triton™ X-100) #51995
4	固定细胞内染色 – FOXP3/转录因子实验步骤	针对转录因子和核蛋白抗体染色的固定和透化缓冲液组	FoxP3/Transcription Factor Fixation/Permeabilization Kit #43481

流式细胞仪 - 用于建立多色组合的抗体和实验步骤选择指南

在流式细胞仪实验中染色活细胞或固定细胞时，您可以选择很多不同的实验步骤。您的实验步骤必须与用于细胞染色的抗体兼容，以避免对表位识别产生负面影响，同时仍允许抗体进入所感兴趣的蛋白所在的细胞组分。

例如，磷酸化流式细胞实验中的细胞内靶标染色要求您在染色前固定并透化细胞。但是，固定 (FIX) 和透化 (PERM) 实验步骤可改变表位与抗体之间的相互作用。通透剂的选择对于检测中使用的抗体的敏感性、特异性和功能尤其具有显著影响。这可能取决于抗原和克隆。

通常使用甲醇等溶剂或 Triton™ X-100 或皂素等去垢剂实现通透。使用皂素进行的通透最不彻底；它通过结合胆固醇在质膜中形成孔道，但不会通透胞内膜结构，例如核膜或线粒体膜。Triton™ X-100 和甲醇能够充分通透大多数胞内膜，从而提供最彻底的通透。然而，甲醇可能会破坏表位，一些抗体（包括一些表面标记物）在进行甲醇通透后不起作用。

本实验步骤兼容性表标识了与通用实验步骤协作的表面和细胞内抗体

Cell Signaling Technology^® (CST) 提供与不同荧光染料偶联的经流式细胞仪验证的抗体的多样化目录。我们已将此通过流式细胞仪的免疫信号转导和表型的实验步骤兼容性表整合在一起，以帮助您快速识别 CST 目录中哪些染色实验步骤和抗体兼容，尤其是在选择多个抗体，在多重组合中用于信号流式细胞仪时。特别的是，该表将帮助您理解：

哪种表面标记抗体（CD 标记）仅与活细胞实验步骤兼容
哪些 CD 标记在通常用于细胞内染色流式细胞仪的固定-透化实验步骤中有效
哪些固定-透化 (fix-perm) 实验步骤与 fix-perm 兼容抗体配合使用
哪些抗体只能与 fix-perm 实验步骤，以及哪些实验步骤配合使用

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抗体克隆信息列出 CST 抗体克隆、表位位置以及用于实验潜在抗体的物种反应性信息。

实验步骤兼容性测试确定每个抗体克隆测试了哪些最常用的实验步骤，以帮助您节省配伍组合的时间。在实验中选择多路复用抗体时，您将要确保每个克隆都与同一实验步骤兼容。绿色标记表示建议使用实验步骤，黄色标记表示实验步骤已经过测试，但可能性能下降，因此建议进一步的实验步骤优化，红色标志表示该抗体不建议用于特定实验步骤，白色标记表示尚未测试实验步骤。

可用偶联物列出了每个克隆可从 CST 获得的偶联抗体产品，从左到右按照相应荧光基团的大最大发射光进行排序。点击产品货号链接，了解有关重要特定抗体偶联物的更多信息。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

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