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流式细胞术活细胞实验步骤

重要事项:请参阅产品网页上的产品专用流式细胞术实验步骤,以确认其是否可与活细胞一起使用,并了解抗体稀释比例建议。

A. 溶液和试剂

:利用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 1X 磷酸盐缓冲盐水(PBS):配制 1 L 的 1X PBS:添加 100 ml 10X PBS (#12528) 至 900 ml 水,然后将其混合。
  2. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来制备 0.5% BSA PBS 缓冲液。储存在 4°C。
  3. 推荐的二抗:要检测未偶联的抗体,请选择与您的一抗(例如兔)的宿主物种匹配的二抗。点击此处以获取被批准用于流式细胞术的二抗的最新列表。

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活性染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品页,了解建议的实验步骤。访问我们的列表,了解经流式细胞术验证的细胞染料列表。

B. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

:如果使用全血,则需在免疫染色之前裂解红细胞并通过离心分离来洗涤。

:理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。

  1. 将所需数量的细胞分装进试管或加样孔中。(通常,每次实验 5x105 至 1x106 个细胞。)
  2. 进行离心使细胞沉淀,并去除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,稀释的一抗按建议的稀释度或根据滴定确定用抗体稀释缓冲液制备。
  4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光保存。
  5. 用抗体稀释缓冲液或 1X PBS 进行离心洗涤。丢弃上清液。重复操作。如果使用直接偶联抗体,则跳到步骤 9。
  6. 在 100 µl 稀释的荧光物质偶联的二抗(按建议稀释度用抗体稀释缓冲液制备)中重悬细胞。
  7. 在冰上孵育 30 分钟。避光保存。
  8. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。丢弃上清液。重复操作。
  9. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。

发布​于 2011 年 2 月 

修订于 2019 年 8 月

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