数千种兔单抗立减30% | 点击此处 >>
7003
20X LumiGLO® Reagent and 20X Peroxide
WB & IP 试剂

20X LumiGLO® Reagent and 20X Peroxide #7003

引用 (10)

一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

购买 # 7003S
产品货号 规格 价格 库存
7003P
5 ml(每个)
7003S
25 ml(每个)

试剂盒(S)包括 数量
LumiGLO® Reagent A (20X) 1 x 25 ml
Peroxide Reagent B (20X) 1 x 25 ml

产品使用信息

(a) 膜结合的 HRP(抗体接合物)用 TBS/T 洗涤三次,持续 5 分钟。

(b) 在水中将 20X LumiGLO® and 20X Peroxide 稀释成 1X 来制备底物(例如,如需 10 ml,则添加 0.5 ml LumiGLO® 和 0.5 ml 过氧化物到 9.0 ml 水中)。

(c) 底物用膜孵育 1 分钟,取足够溶液(膜保持湿润)包裹在塑料中并暴露在 X 射线胶片下。

溶液和试剂:

使用 Milli-Q® 或同等纯水配制溶液。

洗涤缓冲液 (TBS/T):20 mM Tris-HCl (pH 7.6)、

137 mM NaCl 和 0.1% Tween-20

Phototope® Western Detection System 的优点

-灵敏度:检测皮克以下数量的蛋白时通常使用优质抗血清一抗。

-速度:整个检测过程仅需不到 1 小时的时间。曝光时间为几秒到几分钟。

-多次曝光:光以恒速发射持续几分钟,因此您可以进行多次曝光以优化信号强度。以后再次曝光只需加入更多试剂。

存储:

储存在 4°C。

方法概述

使用 Phototope®-HRP Western Blot Detection System 进行的蛋白质印迹实验过程有 6 个基本步骤。

  1. 对蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳:通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白样品和分子量标准品。
  2. 转移:使用标准电印迹法将蛋白转移到膜上。
  3. 封闭膜:封闭后饱和膜上的非特异性结合位点。
  4. 一抗:膜用一抗孵育。
  5. 2 抗:膜用 HRP-linked anti-rabbit IgG antibody 和 HRP-linked anti-biotin antibody 孵育。
  6. 化学发光检测:加入 LumiGLO® 试剂并将发射的光捕获到 X 射线胶片上。

产品说明

LumiGLO®*化学发光底物是一种以鲁米诺为基础的系统,专门用于我们使用固定在膜上的过氧物酶偶联抗体进行的 Phototope®-HRP 检测。在有过氧化氢的情况下,辣根过氧化物酶 (HRP) 将鲁米诺转化成激发的中间二价阴离子。这种二价阴离子在返回其基态的过程中发光。底物暴露在 HRP 下不久后,光发射量达到最大,并持续 0.5-1 小时。通常暴露几秒钟后,光可以被捕获到 X 射线胶片上。延长暴露时间可获得最大敏感性。*避免反复皮肤暴露(请参见随附的材料安全数据表或访问我们的网站了解更多信息)。

背景

化学发光系统已成为一种最全面的蛋白质印迹检测方法。它们可避免与放射性物质和有毒显色底物有关的危险。这些方法的检测速度和灵敏度是传统方法不能比拟的,其结果在胶卷上产生,因此可以永久记录和存储数据。用化学发光法检测到的印迹可以洗脱,因此后续可以用其他抗体重新检测。HRP 标记二抗与特定化学发光底物合用以产生光信号。HRP 接合物的更新速率很高,可以在较短的反应时间内产生良好的灵敏性。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
LumiGLO 是 Kirkegaard & Perry Laboratories 的注册商标。

Powered By OneLink