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6620
SignalSilence® AMPKα2 siRNA I

SignalSilence® AMPKα2 siRNA I #6620

蛋白质印迹法

使用 AMPKα2 Antibody #2757(上图)或 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125(下图),对转染 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-)、SignalSilence® AMPKα2 siRNA I (+) 或 SignalSilence® AMPKα2 siRNA II #6630 (+) 的 HeLa 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。AMPKα2 Antibody 确认 AMPKα2 表达沉默,而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 则用作上样对照。

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CST 建议转染 100 nM AMPKα2 siRNA I 48 至 72 小时后再进行细胞裂解。对于转染流程,请遵照转染试剂制造商提供的实验步骤。如有任何使用问题,请随时联系 CST。

每个小瓶含有相当于 100 次转染的用量,对应于每次转染时 24 孔板中的最终 siRNA 浓度(100 nM),每个孔的总量为 300 μl。

存储:

SignalSilence® siRNA 保存在无 RNA 酶的水中。分装并保存在 -20ºC 下。

Cell Signaling Technology (CST) 的 SignalSilence® AMPKα2 siRNA I 能让研究人员使用 RNA 干扰特异性地抑制 AMPKα2 表达,这种方法通过将双链 RNA 分子递送到细胞内使基因表达选择性沉默。CST 的所有 SignalSilence® siRNA 产品均已经过严格的内部测试,并且蛋白质印迹分析表明可降低靶蛋白表达。

通过三苯甲基分析来逐个碱基地监视寡核苷酸合成,以确保合适的偶联效率。随后通过亲和固相萃取来纯化寡核苷酸。使用质谱分析法进一步分析退火的双链 RNA,从而验证双链的确切组分。使用质谱分析法将每个批次与上一批次进行对比,以最大程度确保批间一致性。

AMP 激活的蛋白激酶 (AMPK) 从酵母到植物和动物中都高度保守,且在调节能量平衡方面发挥关键作用 (1)。AMPK 蛋白以一种异三聚体复合体的形式存在,由一个 α-催化亚基、一个 β-调节亚基和一个 γ-调节亚基组成,每个亚基被两到三个不同基因编码 (α1、2;β1、2;γ1、2、3) (2)。该激酶会被因细胞和环境压力引起AMP/ ATP 比值升高而激活,如热休克,缺氧和缺血 (1)。抑癌基因 LKB1 与辅助蛋白 STRAD 和 MO25 一同将位于活化环里 Thr172 位点的 AMPKα 磷酸化,该位点的磷酸化是 AMPK 激酶活性所必需的 (3-5)。AMPKα 在 Thr258 位点和 Ser485 位点(对于 α1;α2 是 Ser491 位点)也被磷酸化。上游激酶以及这些磷酸化事件的生物学意义尚未被阐明 (6)。β1 亚基是通过豆蔻酰化和多位点磷酸化翻译后修饰的,这些位点包括 Ser24/25 位点、Ser96 位点、Ser101 位点、Ser108 位点和 Ser182 位点 (6,7)。β1 亚基 Ser108 位点的磷酸化似乎对 AMPK 酶活性是必要的,而 Ser24/25 位点和 Ser182 位点的磷酸化会影响 AMPK 定位 (7)。已确定了一些 AMPKγ 亚基的突变,其中大部分位于假定的 AMP/ ATP 结合位点(CBS 或Bateman域)。这些位点的突变导致 AMPK 活性降低,引起心脏或骨骼肌糖原积累 (1,2)。越来越多证据表明,AMPK 不仅调节脂肪酸和糖原的代谢,也通过 EF2 和 TSC2/mTOR 通路调节蛋白质合成和细胞生长,另外还通过 eNOS / nNOS 调节血流量 (1)。

  1. Hardie, D.G. (2004) J Cell Sci 117, 5479-87.
  2. Carling, D. (2004) Trends Biochem Sci 29, 18-24.
  3. Hawley, S.A. et al. (1996) J Biol Chem 271, 27879-87.
  4. Lizcano, J.M. et al. (2004) EMBO J. 23, 833-43.
  5. Shaw, R.J. et al. (2004) Proc Natl Acad Sci U S A 101, 3329-35.
  6. Woods, A. et al. (2003) J Biol Chem 278, 28434-42.
  7. Warden, S.M. et al. (2001) Biochem J 354, 275-83.
Entrez-Gene Id
5563
Swiss-Prot Acc.
P54646
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
SignalSilence 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。

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