Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
16555S | 250 µl |
REACTIVITY | Rab |
SENSITIVITY | |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit |
Product Information
The optimal dilution of the anti-biotin antibody should be determined by titration. However, a final dilution of 1:500 – 1:2000 should yield acceptable results for flow cytometry assays.
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
注:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。
注:人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白(例如,巨噬细胞/单核细胞谱系)时,在用兔抗体进行免疫染色之前,用人 Fc 块预孵育活细胞。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
发布时间 2017 年 6 月
修订时间 2022 年 1 月
实验步骤编号:1504
兔
使用生物素化 KLH 对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
生物素是一种水溶性复合维生素 B(维生素 H 或 B7),它在多种代谢功能中作为辅酶发挥作用。它为五种羧化酶转移二氧化碳,并参与 TCA 循环和糖异生。此外,所有细胞都需要生物素来促进细胞增殖、脂肪酸的产生以及脂肪和氨基酸的代谢 (1)。一种称为生物素酶的酶可催化生物素循环和组蛋白附着。组蛋白生物素化与端粒消减和细胞衰老的调节有关。生物素酶缺乏症是一种罕见的遗传病,如果不治疗,会引起神经病和皮肤病症状 (2)。生物素对其天然配体亲和素有高亲和力。生物素结合位点的复杂和不规则结构使它非常适合结合生物素,并对亲和素-生物素复合体具有高特异性 (3)。这种显著的亲和力已在多种免疫测定中进行了探索,包括 ELISA、流式细胞术、免疫荧光法、原位杂交法、亲合色谱法和免疫组织化学法。Anti-biotin (D5A7) Rabbit mAb #5597 可替代亲和素,从而最小化背景信号强度,最大化信号强度。
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