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20432
PTMScan® Phospho-Enrichment IMAC Fe-NTA Magnetic Beads
蛋白质组分析产品

PTMScan® Phospho-Enrichment IMAC Fe-NTA Magnetic Beads #20432

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该图表显示,使用来源于小鼠胚胎和用 PTMScan® Phospho-Enrichment IMAC Fe-NTA Magnetic Beads 捕获的 4026 非冗余胰蛋白酶肽进行 PhosphoScan® IMAC LC-MS/MS 实验时存在潜在的基序分布。在该数据组中,84% 的肽在丝氨酸残基上被磷酸化,13% 在苏氨酸上被磷酸化,3% 在酪氨酸上被磷酸化。

使用源于小鼠胚胎和用 PTMScan® Phospho-Enrichment IMAC Fe-NTA Magnetic Beads 捕获的 4026 非冗余胰蛋白酶肽进行 PhosphoScan® IMAC LC-MS/MS 实验来产生基序标志。标志表示该数据组中修饰位点周围某个特定位点的氨基酸的相对频率。

产品使用信息

细胞在含尿素的缓冲液中进行裂解,细胞蛋白被蛋白酶消化,所产生的肽通过反相固相提取进行纯化。随后使用 PTMScan® IMAC Beads 使磷酸肽富集。未结合的肽通过洗涤被去除,捕获的磷酸肽则用碱性 pH 缓冲液洗脱。在浓缩富集肽进行 LC-MS/MS 分析前,先在微探针尖端进行反相纯化使肽脱盐,并将肽与杂质分离。详细的实验步骤包括磁珠。

存储:

IMAC Fe-NTA 磁珠保存在 20% 乙醇中。如需长期保存,则将缓冲液换成长期保存缓冲液(甲醇 1:1:1 v/v/v 甲醇、乙腈和 0.01% 乙酸)。请参见实验步骤了解详细信息。保存在 4ºC 下。切勿冷冻磁珠。

产品说明

PTMScan® Phospho-Enrichment IMAC Fe-NTA Magnetic Beads 使用固定化金属亲和色谱来捕获磷酸化肽。带负电荷的磷酸基团被吸引到磁珠上带正电荷的金属离子上。连同液相色谱串联质谱分析法 (LC-MS/MS),这种方法让研究人员能够以高度特异性和敏感性来分离、识别和定量分析大量磷酸化细胞肽,从而综合概述细胞和组织样品的磷酸化。如需了解更多有关 PTMScan® Proteomics Services 的信息,请访问 https://www.cellsignal.com/services/index.html。

背景

固定化金属亲和色谱或 IMAC 已广泛用于通过结合负电荷群使生物样品的蛋白和肽富集。二价过渡金属离子 Co2+、Cu2+、Ni2+ 和 Zn2+ 通常用于纯化在聚组氨酸或半胱氨酸中富集的蛋白,以及有金属亲和力的蛋白。三价金属离子 Fe3+、Ga3+、Al3+ 以及 Ti4+ 和 Zr4+ 通常用于蛋白质组学研究中的磷酸肽富集 (1)。亚氨基二乙酸 (IDA) 或次氮基三乙酸 (NTA) 用于将金属离子螯合到琼脂糖包被磁珠上。在比较研究中,NTA 经证实比 IDA 更能选择性捕获和识别更多磷酸肽。对于识别的磷酸肽数量,Ga3+ 和 Fe3+ 有可比性 (2)。与使用 TiO2的金属氧化物亲和色谱相比,Fe3+ IMAC 表现稍微较好,因为相对较少偏好酸性肽 (pI < 4) 的 Fe3+ 而言,TiO2 更加偏好酸性磷酸肽 (pI > 4) (3)。PTMScan® Fe-NTA Magnetic Beads 是一种有效的磷酸肽富集工具,而且很少有或没有磷酸残基环境的偏倚。它们可单独使用或连同免疫亲和富集来辅助任何 PhosphoScan® LC-MS/MS 蛋白质组学研究。

  1. Block, H. et al. (2009) Methods Enzymol 463, 439-73.
  2. Ficarro, S.B. et al. (2009) Anal Chem 81, 4566-75.
  3. Yue, X. et al. (2015) Anal Chem 87, 8837-44.
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
PhosphoScan 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
PTMScan 是 Cell Signaling Technology,Inc. 的商标
在某些方法中,使用 Cell Signaling Technology (CST) 基序抗体(例如,美国专利号 7,198,896 和 7,300,753)可能要求获得 CST 的许可证。关于学术许可条款信息,请您的技术转移办公室按照 CST_ip@cellsignal.com 联系 CST 法律部门。关于商业许可条款信息,请按照 ptmscan@cellsignal.com 联系 CST Pharma 服务部门。

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