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PTMScan® Phospho-CK2 Substrate Motif (S*/T*DXE) Kit
蛋白质组分析产品

PTMScan® Phospho-CK2 Substrate Motif (S*/T*DXE) Kit #12170

引用 (3)

该图表显示了一项PhosphoScan® LC-MS/MS 实验中胰蛋白酶肽的基本类 CK2 底物基序,这种肽由经 Calyculin A #9902 和过钒酸钠处理且用 PTMScan® Phospho-CK2 Substrate Motif (S*/T*DXE) Immunoaffinity Beads 进行免疫沉淀的 Jurkat 细胞所产生。在 354 种包含基序的肽中,54% 包含磷酸化丝氨酸,46% 包含磷酸化苏氨酸。在 +1 位点和在 +3 位点有天冬氨酸或谷氨酸的肽所占比例分别为 83% 和 73%。在 +1 和 +3 位点同时有天冬氨酸或谷氨酸的肽所占比例为 63%。

对471 条非重复胰蛋白酶肽进行 PhosphoScan® LC-MS/MS 实验可产生基序标识,这种肽源于经 Calyculin A #9902 和过钒酸钠处理且用 PTMScan® Phospho-CK2 Substrate Motif (S*/T*DXE) Immunoaffinity Beads 进行免疫沉淀的 Jurkat 细胞。这种 PhosphoSitePlus® 标识表示氨基酸在某个残基位点相对于背景中该氨基酸的富集度,在这种情况下,背景为人蛋白质组。标识顶部所示的残基最为富集,而 y 轴下方的残基在样品中发生富集的频率预计低于在蛋白质组中频率。PSP 标识反映了该抗体对 S*/T*DXE 基序的特异性。如需了解更多有关使用 PSP 进行基序分析的信息,请访问 www.phosphosite.org。

产品包括 盖颜色 容量(计数)
PTMScan® Phospho-CK2 Substrate Motif (S*/T*DXE) Immunoaffinity Beads 蓝色 10 x 80 µl
PTMScan® IAP Buffer (10X) 9993 白色 10 x 600 µl
PTMScan® Limited Use License 1 x 1 次

产品使用信息

细胞在含尿素的缓冲液中进行裂解,细胞蛋白被蛋白酶消化,所产生的肽通过反相固相提取进行纯化。肽段随后使用接合 protein A agarose beads 的 PTMScan® Motif Antibody 进行免疫亲和纯化。通过洗涤去除未结合的肽,捕获的包含 PTM 的肽用稀酸洗脱。在浓缩富集肽进行 LC-MS/MS 分析前,先在微探针尖端进行反相纯化使肽脱盐,并将肽与抗体分离。CST 建议用试剂盒中包含的 PTMScan® IAP Buffer #9993。该试剂盒还包含详细的实验步骤以及允许使用获专利的 PTMScan® 方法的有限使用许可。

存储:

抗体微珠以含 50% 甘油的 IAP 缓冲液提供。储存于 -20°C 的温度下。请不要分装抗体。

产品说明

PTMScan® 技术采用 Cell Signaling Technology (CST) 的专有方法通过免疫沉淀实现肽富集,这种方法使用一种特殊微珠接合抗体以及液相色谱法 (LC)-质谱法 (MS/MS) 对细胞蛋白中的翻译后修饰 (PTM) 位点进行定量分析。这包括磷酸化 (PhosphoScan®)、泛素化 (UbiScan®)、乙酰化 (AcetylScan®) 和甲基化 (MethylScan®) 等等。PTMScan® 技术能让研究人员分离、鉴定以及定量大量翻译后修饰的细胞肽,具有高特异性和灵敏度,从而可以全面了解细胞和组织样品中的 PTM,对这些修饰位点发生于何处不会具有偏好性 (1)。如需了解更多有关 PTMScan® 蛋白质组服务的信息,请访问 www.cellsignal.com/common/content/content.jsp?id=ptmscan-services

背景

通过结合 LC-MS/MS,PhosphoScan® 技术采用 phospho-residue (Tyr, Ser, Thr) motif antibody 来对细胞提取物进行磷酸肽免疫亲和纯化,从而检测和定量分析磷酸化水平的变化 (1)。酪蛋白激酶 II (CK2) 是一种高度保守、普遍表达且呈组成性激活的四聚丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其成百上千的底物参与调控细胞周期进程、凋亡、转录、炎症和 DNA 损伤反应等各种细胞进程。研究表明 CK2 与病毒感染、癌症和其他疾病有关 (2-6)。CK2 底物包含许多位于磷酸化丝氨酸或苏氨酸残基下游的酸性残基(Asp 和 Glu)。CK2 底物的共同序列是 pS/pTD/EXD/E,该序列在 +3 位点有最关键的残基,后跟 +1 位点的残基 (7)。

  1. Pinna, L.A. and Allende, J.E. (2009) Cell Mol Life Sci 66, 1795-9.
  2. St-Denis, N.A. and Litchfield, D.W. (2009) Cell Mol Life Sci 66, 1817-29.
  3. Trembley, J.H. et al. (2009) Cell Mol Life Sci 66, 1858-67.
  4. Dominguez, I. et al. (2009) Cell Mol Life Sci 66, 1850-7.
  5. Perez, D.I. et al. (2011) Med Res Rev 31, 924-54.
  6. Meggio, F. and Pinna, L.A. (2003) FASEB J 17, 349-68.
  7. Rush, J. et al. (2005) Nat Biotechnol 23, 94-101.
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

AcetylScan 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
MethylScan 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
PTMScan 是 Cell Signaling Technology,Inc. 的商标
UbiScan 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
在某些方法中,使用 Cell Signaling Technology (CST) 基序抗体(例如,美国专利号 7,198,896 和 7,300,753)可能要求获得 CST 的许可证。关于学术许可条款信息,请您的技术转移办公室按照 CST_ip@cellsignal.com 联系 CST 法律部门。关于商业许可条款信息,请按照 ptmscan@cellsignal.com 联系 CST Pharma 服务部门。

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