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35741
PTMScan® Peptide Purification Kit
蛋白质组分析产品

PTMScan® Peptide Purification Kit #35741

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35741S
1 个试剂盒(10 次纯化)

产品包括 容量(计数)
PTMScan® C18 Reversed-Phase Columns 1 x 10 ea
PTMScan® Sample Reservoir Syringes 1 x 10 ea

产品使用信息

注意:

• 一根 C18 反相柱上可纯化大约 20mg 的蛋白酶消化肽。

• “使用说明”部分所述的步骤应用重力自动加料。在流速大幅度降低的情况下,您可以使用注射器柱塞对纯化柱施加少许压力。

• 每次向纯化柱应用溶液时,注射器和纯化柱入口间的狭窄连接处会形成气泡。这会大大降低流速。应使用 P200 移液管上的凝胶上样吸头进行冲洗来除去气泡。

1. 在上样前,加入 1/20 体积的 20% TFA 来酸化肽,以得到最终浓度为 1% 的 TFA。

2. 在室温下以 1,780x g 的离心力离心分离 15 分钟来澄清肽样品。

3. 从 10 ml 的注射器中取出和保存柱塞,并接到 C18 柱的较短末端。

4. 使用 5 ml 的 100% 乙腈来预湿 C18 反相柱

5. 连续使用 1、5 和 6 ml 的 0.1% TFA 洗涤纯化柱三次,以让纯化柱平衡。

6. 将酸化的肽样品上样到纯化柱上;肽将结合 C18 材料。

7. 连续使用 1、5 和 6 ml 的 0.1% TFA 洗涤纯化柱三次。

8. 纯化柱用 2 ml 的 5% 乙腈和 0.1% TFA 洗涤。

9. 将每个纯化柱放在干净的 50ml 新收集管之上。

10. 肽用 3 ml 的 40% 乙腈和 0.1% TFA 洗脱 3 次。

11. 随后,洗脱的肽应完全冷冻,以进入冻干步骤。在 -80°C 的冰箱中或在干冰和乙醇浴中冷冻 4 - 16 小时。

参阅具体的 PTMScan 实验步骤,了解进一步的详情。

存储:

在室温下,纯化柱和注射器可保存在原密封袋中长达 24 个月。为了获得最佳结果,应将打开的袋子封好并用胶带密封,重新密封的袋子可用干燥剂保存长达 6 个月。

产品说明

C18 反相固相萃取柱是对肽进行纯化和脱盐的有用工具,为 PTMScan 实验步骤和其他质谱法应用做准备。

背景

反相色谱法是一种用于分析和制备生化分离和纯化的重要技术。分辨率和回收率出色的反相色谱法可用来分离疏水蛋白、肽和核酸。此外,在流动相中使用离子配对修饰物,可对带电溶质(如亲水肽和完全脱保护的寡核苷酸)进行反相色谱分析。制备反相色谱法已广泛用于各种应用,包括对用于测序的蛋白片段进行微纯化 (1)、对重组蛋白产物进行规模纯化 (2) 和质谱蛋白质组分析 (3)。

  1. Renlund, S. et al. Peptides 14, 1125-32.
  2. Olson, C.V. et al. (1994) J Chromatogr A 675, 101-12.
  3. Rush, J. et al. (2005) Nat Biotechnol 23, 94-101.
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
PTMScan 是 Cell Signaling Technology,Inc. 的商标
Sep-Pak® 是 Waters Corporation 的注册商标。

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