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14809
PTMScan® Pan-Methyl Lysine Kit
蛋白质组分析产品

PTMScan® Pan-Methyl Lysine Kit #14809

引用 (3)

该图表显示了包含甲基化赖氨酸残基蛋白的相对类别分布,这种蛋白来源于使用 PTMScan® Pan-Methyl Lysine Immunoaffinity Beads 对小鼠肝脏组织进行的 MethylScan® LC-MS/MS 实验所鉴定的肽。在这组(包含 130 条肽)中,单甲基化赖氨酸肽的频率为 64%,二甲基化赖氨酸肽的频率为 24%,三甲基化赖氨酸肽占据 12% 的样品。

使用130 条非重复胰蛋白酶解肽进行 MethylScan® LC-MS/MS 实验产生了该基序标识,这种蛋白酶解肽来源于用 PTMScan® Pan-Methyl Lysine Immunoaffinity Beads 进行免疫沉淀的小鼠肝脏组织。在该数据组内,该标识表示氨基酸出现在中央甲基化赖氨酸残基周围的每个位点的相对频率。

产品包括 盖颜色 容量(计数)
PTMScan® Pan-Methyl Lysine Immunoaffinity Beads 蓝色 10 x 80 µl
PTMScan® IAP Buffer (10X) 9993 白色 10 x 600 µl
PTMScan® Limited Use License 1 x 1 次

产品使用信息

细胞在含尿素的缓冲液中进行裂解,细胞蛋白被蛋白酶消化,所产生的肽通过反相固相提取进行纯化。肽段随后使用接合 protein A agarose beads 的 PTMScan® Motif Antibody 进行免疫亲和纯化。通过洗涤去除未结合的肽,捕获的包含 PTM 的肽用稀酸洗脱。在浓缩富集肽进行 LC-MS/MS 分析前,先在微探针尖端进行反相纯化使肽脱盐,并将肽与抗体分离。CST 建议用试剂盒中包含的 PTMScan® IAP Buffer #9993。该试剂盒还包含详细的实验步骤以及允许使用获专利的 PTMScan® 方法的有限使用许可。

存储:

抗体微珠以含 50% 甘油的 IAP 缓冲液提供。储存于 -20°C 的温度下。请不要分装抗体。

产品说明

PTMScan® 技术采用 Cell Signaling Technology (CST) 的专有方法通过免疫沉淀实现肽富集,这种方法使用一种特殊微珠接合抗体以及液相色谱法 (LC)-质谱法 (MS/MS) 对细胞蛋白中的翻译后修饰 (PTM) 位点进行定量分析。这包括磷酸化 (PhosphoScan®)、泛素化 (UbiScan®)、乙酰化 (AcetylScan®) 和甲基化 (MethylScan®) 等等。PTMScan® 技术能让研究人员分离、鉴定以及定量大量翻译后修饰的细胞肽,具有高特异性和灵敏度,从而可以全面了解细胞和组织样品中的 PTM,不会对这些修饰位点发生于何处产生任何先入为主的偏见。如需了解更多有关 PTMScan® 蛋白质组服务的信息,请访问 www.cellsignal.com/common/content/content.jsp?id=proteomics

背景

赖氨酸残基的甲基化作用是一种常见的调控翻译后修饰 (PTM),会导致 ε 氨基组赖氨酸被蛋白赖氨酸甲基转移酶 (PKMT) 单甲基化、二甲基化或三甲基化。这两种 PKMT 组是根据结构和催化反应机制确定的;I 类甲基转移酶或七种 β 链酶以及含有 V 类甲基转移酶的 SET 结构域。两者均使用甲基供体 S 腺苷基 L 蛋氨酸实现组蛋白和非组蛋白甲基化。I 类甲基转移酶可使氨基酸、DNA 和 RNA 甲基化 (1,2)。六种甲基赖氨酸结合蛋白家族按结合域划分为:MBT、PHD 结构域、 Tudor、PWWP、WD40 复制和染色质域。许多蛋白会根据基于赖氨酸甲基化状态表现出不同的结合性 (3)。KDM1 亚科赖氨酸脱甲基酶可催化单甲基化和二甲基化赖氨酸脱甲基化,同时戊邻酮二酸盐依赖型 JmjC (KDM2-7) 亚科酶也可修饰三甲基化赖氨酸残基 (4)。

大多数 PKMT 底物均为组蛋白和转录因子,重点凸显出赖氨酸甲基化在调控染色质结构和基因表达中发挥的重要作用。G9A/GLP 可使组蛋白 H3 的 Lys9 单或二甲基化,SETDB1 可使组蛋白 H3 Lys9 三甲基化,以激活转录。相同残基的 JHDM3A 介导的脱甲基化作用可生成单甲基化 Lys9,并抑制基因转录 (5)。抑癌基因 p53 可由至少四个位点的甲基化作用调控。可通过 SMYD2 Lys370 P53 单甲基化抑制 p53 介导的转录;相同残基处的二甲基化可通过阻碍 53BP1 结合来进一步抑制 p53。在 Lys382 位点二甲基化可抑制 DNA 损伤后的 P53 泛素化。由 SET8 在 Lys382 位点单甲基化,可抑制 p53 转录活性,同时在 Lys372 位点 SET7/9 单甲基化可抑制在 Lys370 位点的 SMYD2 甲基化作用,使 p53 蛋白保持稳定。G9A/GLP 在 Lys373 位点二甲基化,可抑制 p53 介导的凋亡,并且与 p21 启动子处的组蛋白 H3 Lys9 三甲基化相关 (1,6)。PKMT 过表达与多种人类癌症相关,这对药物研发中靶定蛋白赖氨酸甲基转移酶发挥了重要作用。

  1. Lanouette, S. et al. (2014) Mol Syst Biol 10, 724.
  2. Clarke, S.G. (2013) Trends Biochem Sci 38, 243-52.
  3. Herold, J.M. et al. (2011) Curr Chem Genomics 5, 51-61.
  4. Thinnes, C.C. et al. (2014) Biochim Biophys Acta 1839, 1416-32.
  5. Klose, R.J. et al. (2006) Nature 442, 312-6.
  6. Yost, J.M. et al. (2011) Curr Chem Genomics 5, 72-84.
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

AcetylScan 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
MethylScan 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
PhosphoScan 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
PTMScan 是 Cell Signaling Technology,Inc. 的商标
UbiScan 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
在某些方法中,使用 Cell Signaling Technology (CST) 基序抗体(例如,美国专利号 7,198,896 和 7,300,753)可能要求获得 CST 的许可证。关于学术许可条款信息,请您的技术转移办公室按照 CST_ip@cellsignal.com 联系 CST 法律部门。关于商业许可条款信息,请按照 ptmscan@cellsignal.com 联系 CST Pharma 服务部门。

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