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12810
PTMScan® Cleaved Caspase Substrate Motif [DE(T/S/A)D] Kit
蛋白质组分析产品

PTMScan® Cleaved Caspase Substrate Motif [DE(T/S/A)D] Kit #12810

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该图表显示了含有羧基末端天冬氨酸的 1044 条非重复胰蛋白酶肽内的基本基序分布,这种肽来源于用 Staurosporine #9953 1μM(3 小时;+)处理且经 PTMScan® Cleaved Caspase Substrate Motif [DE(T/S/A)D] Immunoaffinity Beads 免疫沉淀的 HeLa 细胞进行的 LC-MS/MS 实验。同一数据组内,在 -3 位点含有 D 的肽比例为 36%,在 -2 位点含有 E 的肽比例为 53%。

使用含有羧基末端天冬氨酸的 1044 条非重复胰蛋白酶肽进行 PTMScan® LC-MS/MS 实验可产生基序标识,这种肽来源于经 Staurosporine #9953 1 μM 处理 3 小时以诱导凋亡的人 HeLa 细胞。肽使用 PTMScan® Cleaved Caspase Substrate Motif [DE(T/S/A)D] Immunoaffinity Beads 进行免疫沉淀。该标识表示各位置上氨基酸引导至天冬氨酸羧基端的相对频率。

产品包括 盖颜色 容量(计数)
PTMScan® Cleaved Caspase Substrate Motif [DE(T/S/A)D] Immunoaffinity Beads 蓝色 10 x 80 µl
PTMScan® IAP Buffer (10X) 9993 白色 10 x 600 µl
PTMScan® Limited Use License 1 x 1 次

产品使用信息

细胞在含尿素的缓冲液中进行裂解,细胞蛋白被蛋白酶消化,所产生的肽通过反相固相提取进行纯化。肽段随后使用接合 protein A agarose beads 的 PTMScan® Motif Antibody 进行免疫亲和纯化。通过洗涤去除未结合的肽,捕获的包含 PTM 的肽用稀酸洗脱。在浓缩富集肽进行 LC-MS/MS 分析前,先在微探针尖端进行反相纯化使肽脱盐,并将肽与抗体分离。CST 建议用试剂盒中包含的 PTMScan® IAP Buffer #9993。该试剂盒还包含详细的实验步骤以及允许使用获专利的 PTMScan® 方法的有限使用许可。

存储:

抗体微珠以含 50% 甘油的 IAP 缓冲液提供。储存于 -20°C 的温度下。请不要分装抗体。

产品说明

PTMScan® 技术采用 Cell Signaling Technology (CST) 的专有方法通过免疫沉淀实现肽富集,这种方法使用一种特殊微珠接合抗体以及液相色谱法 (LC)-质谱法 (MS/MS) 对细胞蛋白中的翻译后修饰 (PTM) 位点进行定量分析。这包括磷酸化 (PhosphoScan®)、泛素化 (UbiScan®)、乙酰化 (AcetylScan®) 和甲基化 (MethylScan®) 等等。PTMScan® 技术能让研究人员分离、鉴定以及定量大量翻译后修饰的细胞肽,具有高特异性和灵敏度,从而可以全面了解细胞和组织样品中的 PTM,对这些修饰位点发生于何处不会具有偏好性 (1)。如需了解更多有关 PTMScan® 蛋白质组服务的信息,请访问 www.cellsignal.com/common/content/content.jsp?id=ptmscan-services

背景

凋亡是导致受高度调节、编程形式细胞死亡的生理过程,这个过程是多细胞生物中生长和发育的正常组成部分。天冬氨酸定向的半胱氨酸蛋白酶-caspase 对凋亡机制非常重要 (1)。内在通路会启动细胞内产生的信号的凋亡级联,如 DNA 损伤,外部通路则会在胞外信号的刺激下启动凋亡,如 FasL。在任何一种情况下,起始因子caspase(如 caspase-8 和 9)会开始裂解包含效应子 caspase 的下游底物,如最重要的执行caspase, caspase-3 (2,3)。这些效应子caspase会使凋亡级联扩增,从而靶向正常细胞功能所需的许多关键蛋白。除了在发育生物学中发挥作用外,凋亡调节对研究癌症、自身免疫和感染性疾病等具有广泛的意义 (4)。在人蛋白质组中,有成千上万个已知或预测的caspase裂解活化位点,所有位点均在天冬氨酸残基或谷氨酸残基(极少情况下)上被裂解活化。所产生的包含羧基末端天冬氨酸的片段通常会有发生某些变化的 XEXD 基序 (5)。PTMScan® Cleaved Caspase Substrate Motif [DE(T/S/A)D] Kit 提供一种独特和灵敏的方法来对成百上千的裂解活化 caspase 底物进行定量分析,包括 caspase-3 和 7、NEDD1、HDAC3、MCM4、Notch1、eIF2B、raptor、Bid、Smad6、NFAT90 和 PTEN 等。

  1. Kaufmann, T. et al. (2012) Cell Death Differ 19, 42-50.
  2. Cohen, G.M. (1997) Biochem J 326 ( Pt 1), 1-16.
  3. Alenzi, F.Q. et al. (2010) Asian Pac J Cancer Prev 11, 271-80.
  4. Favaloro, B. et al. (2012) Aging (Albany NY) 4, 330-49.
  5. Fischer, U. et al. (2003) Cell Death Differ 10, 76-100.
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

AcetylScan 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
MethylScan 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
PTMScan 是 Cell Signaling Technology,Inc. 的商标
UbiScan 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
在某些方法中,使用 Cell Signaling Technology (CST) 基序抗体(例如,美国专利号 7,198,896 和 7,300,753)可能要求获得 CST 的许可证。关于学术许可条款信息,请您的技术转移办公室按照 CST_ip@cellsignal.com 联系 CST 法律部门。关于商业许可条款信息,请按照 ptmscan@cellsignal.com 联系 CST Pharma 服务部门。

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