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50068
Vasopressin (D8T3K) Rabbit mAb

Vasopressin (D8T3K) Rabbit mAb #50068

应用

反应性 敏感性 MW (kDa) 同型
M 内源性 兔 IgG
IF-F

使用 Vasopressin (D8T3K) Rabbit mAb(绿色)对正常小鼠脑的下丘脑区域(左图)和放大图像(右图)进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

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免疫荧光法(冰冻)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭缓冲液:(1X PBS / 5% 常规血清/ 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 0.5 ml 同一物种来源的常规血清作为二抗(例如 Normal Goat Serum (#5425) 添加至 9.5 ml 1X PBS)并充分混合。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. 建议使用偶联荧光素的抗兔二抗:

    注意:首次使用一抗或荧光物质标记的二抗时,用滴定法检测抗体,以确定哪种稀释度会在最低的背景下为您的样品产生最强的特定信号。

  6. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 样品制备 -冰冻/恒冷箱切片 (IF-F)

  1. 冰冻固定组织进行免疫染色(C 部分)。
  2. 对新鲜未固定的冰冻组织,请立刻按下列步骤固定:
    1. 切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。

      注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用。

    2. 室温下固定切片 15 分钟。
    3. 吸干液体后用 1X PBS 冲洗三次,每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时,按照说明书中推荐的稀释比例,在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 用抗体稀释缓冲液将荧光物质标记的二抗稀释后,室温下避光孵育标本 1–2 小时。
  7. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  8. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  9. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​于 2006 年 11 月 

修订于 2016 年 7 月

实验步骤编号:151

应用 稀释度
免疫荧光法(冰冻) 1:50
存储:

保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。

Vasopressin (D8T3K) Rabbit mAb 可识别内源水平的总加压素蛋白。

物种反应性:

小鼠

基于 100%序列同源性预测发生反应的物种:

使用与人加压素蛋白的 Pro155 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

加压素是一种被大细胞神经元释放到循环中的神经内分泌肽,大细胞神经元的细胞体常见于下丘脑室旁核和视上核。最初从脑下垂体提取物中分离出来,随后在 1951 中被合成 (1)。加压素通过激活 G 蛋白偶联的 V1a、V1b(也称 V3)和 V2 受体起作用,并在维持水平衡方面发挥基础作用。其中一个主要功能是体内水分保留 (2),因此其替代性名称为抗利尿激素或 ADH。加压素还会导致外周血管阻力升高,从而使动脉血压增加 (3)。加压素还与其他生理过程有关,如急性心衰 (4)、疼痛 (5) 和代谢综合征 (6)。

  1. Turner, R.A. et al. (1951) J Biol Chem 191, 21-8.
  2. Robertson, G.L. (1976) Recent Prog Horm Res 33, 333-85.
  3. Aoyagi, T. et al. (2009) Kidney Int 76, 1035-9.
  4. Gilotra, N.A. and Russell, S.D. (2014) World J Cardiol 6, 1252-61.
  5. Luttinger, D. et al. (1984) Int Rev Neurobiol 25, 185-241.
  6. Saleem, U. et al. (2009) J Clin Endocrinol Metab 94, 2558-64.
Entrez-Gene Id
551
Swiss-Prot Acc.
P01185
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
DRAQ5 是 Biostatus Limited 的注册商标。

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