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41134
TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb
一抗
单克隆抗体

TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb #41134

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筛选器:
  1. IHC
Immunohistochemistry Image 1 - TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb

使用 TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb 对石蜡包埋的正常人脑细胞进行免疫组织化学分析。

Immunohistochemistry Image 2 - TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb

使用 TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb(顶部图)或 TMEM119 Rabbit mAb(底部图)对石蜡包埋的人小脑细胞(左图)或结肠癌细胞(右图)进行免疫组织化学分析。这两种抗体可检测人 TMEM119 上的独立、独特表位。使用两种抗体获得的相似染色模式有助于确认染色特异性。

Immunohistochemistry Image 3 - TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb

使用 TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb 对石蜡包埋的正常人肺细胞进行免疫组织化学分析。

Immunohistochemistry Image 4 - TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb

以浓度匹配的 Mouse (E5Y6Q) mAb IgG2a Isotype Control #61656(右图)作为对照,使用 TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb(左图)对石蜡包埋的人肺腺癌细胞进行免疫组织化学分析。

Immunohistochemistry Image 5 - TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb

使用 TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb 对石蜡包埋的人淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。

Immunohistochemistry Image 6 - TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb

使用 TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb 对未转染(左图)或转染 TMEM119(右图)的石蜡包埋的 293T 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。

Immunohistochemistry Image 7 - TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb

使用 TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb 对石蜡包埋的正常人睾丸细胞进行免疫组织化学分析。

购买 # 41134S
产品货号 规格 价格 库存
41134S
100 µl

支持数据

反应性 H
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 小鼠 IgG2a

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
免疫组织化学(石蜡) 1:200 - 1:800

保存

保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。不要分装抗体。‭

实验步骤

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免疫组织化学(石蜡)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 二甲苯。
  2. 无水变性乙醇,组织级(100% 和 95%)。
  3. 去离子水 (dH2O)。
  4. 苏木精(可选)。
  5. 洗涤缓冲液
    1. 含 Tween® 20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液:要制备 1L 1X TBST,添加 100 ml 含 Tween® 20 的 10 X Tris 盐缓冲液 (#9997) 至 900 ml dH20 中并混合。
  6. SignalStain® Antibody Diluent (#8112).
  7. 1X 柠檬酸盐修复液:要制备 250 mL 的 1X 柠檬酸盐修复液,将 25 ml 的 SignalStain® Citrate Unmasking Solution (10X) (#14746) 稀释到 225 mL 的 dH2O 中。
  8. 3% 过氧化氢:要制备 100 ml,添加 10 ml 30% H2O2 至 90 ml dH2O 中。
  9. 封闭液:TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum:要制备 5 ml 1X TBST,添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution:要制备 4 mL of dH2O,添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  10. 检测系统:SignalStain® Boost IHC Detection Reagents (HRP, Mouse #8125)。
  11. 底物:SignalStain® DAB Substrate Kit (#8059)。
  12. 苏木精: Hematoxylin (#14166)。
  13. 封片剂: SignalStain® Mounting Medium (#14177)。

B. 脱蜡/复水

注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤:
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次,每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。

C. 抗原修复

对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。

D. 染色

  1. 用 dH2O 清洗切片三次,每次 5 分钟。
  2. 切片放入 3 % 过氧化氢水溶液中,孵育 10 分钟。
  3. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  4. 用洗涤缓冲液清洗切片持续 5 分钟。
  5. 使用 100–400 µl 封闭液将每张切片在室温下封闭 1 小时。
  6. 去除封闭液,并给每块切片添加 100–400 µl 在 SignalStain® Antibody Diluent (#8112) 中稀释过的一抗。4°C 孵育过夜。
  7. 让 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Mouse #8125) 平衡至室温。
  8. 清除抗体溶液,用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  9. 按需在切片上滴 1–3 滴 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Mouse #8125)。在加湿箱中室温孵育 30 分钟。
  10. 用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  11. 加入 1 滴 (30 µl) SignalStain® DAB Chromogen Concentrate 至 1 ml 的 SignalStain® DAB Diluent 中,使用前充分混合。
  12. 在每张切片上应用 100–400 µl SignalStain® DAB,并密切观察,通常 1–10 分钟即可得到合适的染色强度。
  13. 将切片浸入 dH2O 中。
  14. 如果需要,使用 hematoxylin (#14166) 复染切片。
  15. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  16. 使切片脱水:
    1. 在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。
    2. 在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
    3. 在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
  17. 使用盖玻片和封片剂 (#14177) 封片。

检测试剂/底物兼容性
推荐的
检测试剂
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Mouse) #8125 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Mouse) #31926
兼容的
色原
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632  

注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。


发布​于 2010 年 2 月 

修订于 2020 年 6 月

实验步骤编号:280

特异性/敏感性

TMEM119 (E3E4T) Mouse mAb 可检测 TMEM119 总蛋白的内源水平。

物种反应性:

来源/纯化

通过采用与人 TMEM119 蛋白氨基末端周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

跨膜蛋白119 (TMEM119) 是功能未知的细胞表面蛋白,仅由髓系和神经细胞的小胶质细胞亚群表达 (1)。具有分支和变形虫形态的 Iba1+小胶质细胞表达 TMEM119,而 Iba1+巨噬细胞为 TMEM119 阴性 (2)。已证实 TMEM119 和其他稳态基因在疾病相关小胶质细胞 (DAM) 中下调。这些 DAM 小胶质细胞在人和小鼠中均是保守的,并已在阿尔茨海默病 (AD)、肌萎缩性侧索硬化症 (ALS) 以及 5XFAD 和 APP/PS1小鼠模型中发现。作为小胶质细胞标记物,这种蛋白质的特异性已被证明对于标记健康组织中的小胶质细胞以及将其从神经退行性疾病模型中浸润巨噬细胞和其他细胞类型中分辨出来具有重要意义 (1,2)。

  1. Bennett, M.L. et al. (2016) Proc Natl Acad Sci U S A 113, E1738-46.
  2. Satoh, J. et al. (2016) Neuropathology 36, 39-49.
  3. Deczkowska, A. et al. (2018) Cell 173, 1073-81.
  4. Keren-Shaul, H. et al. (2017) Cell 169, 1276-1290.e17.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
SignalStain 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
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