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9916
Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit
一抗

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit #9916

免疫印迹法图像 1

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(上)或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691(下),对未经处理或经 LY294002/Wortmannin 处理的 PC-3 细胞、经血清饥饿或 PDGF 处理的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 2

使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对重组 Akt1 蛋白、Akt2 蛋白和 Akt3 蛋白及来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 3

Phospho-c-Raf (Ser259) Antibody 的位点特异性:使用 Phospho-Raf (Ser259) Antibody 或 Myc 抗体对带有 Myc 标签的野生型(泳道 1 和 3)和 S259A 突变体(泳道 2 和 4)重组 c-Raf 蛋白进行蛋白质印迹分析。(由麻省总医院的 Guri Tzivion 博士惠赠。)

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免疫印迹法图像 4

使用 Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb(上)和 α/β-Tubulin Antibody #2148(下)对经 λ 磷酸酶或 PDGF 处理的 GSK-3α (-/-)(泳道 1,2)和 GSK-3β (-/-)(泳道 3,4)小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 提取物进行蛋白质印迹法分析。(野生型 MEF、GSK-3α (-/-) 和 GSK-3β (-/-) 细胞由加拿大多伦多大学的 Jim Woodgett 博士友情提供)。

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免疫印迹法图像 5

使用 Phospho-PTEN (Ser380) Antibody (上图)或 PTEN Antibody #9552(下图)对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。该抗体的磷酸特异性通过在蛋白质印迹转移后用牛小肠碱性磷酸酶 (CIP) 处理膜来确定。

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免疫印迹法图像 6

使用 Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAb (上图)和 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691(下图)对 PC3 细胞、HCT116 野生型和 HCT116 PDK1 -/- 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。(HCT116 野生型和 HCT116 PDK1 -/- 细胞由美国马里兰州巴尔的摩约翰霍普金斯大学的 Bert Vogelstein 博士惠赠)。

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免疫印迹法图像 7

使用 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb(上图)或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691(下图)对未经处理 (-) 或已经 Human Platelet-Derived Growth Factor AA (hPDGF-AA) #8913(100 ng/ml,5 分钟;+)处理的 NIH/3T3 细胞与未经处理的 (-) LNCaP 和 PC-3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 8

一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

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免疫组织化学(石蜡)图像 9

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(左)或 PTEN (138G6) Rabbit mAb #9559(右),对石蜡包埋的 MDA-MB-468 异种移植物进行免疫组织化学分析。注意:PTEN 缺失型 MDA-MB-468 细胞存在 P-Akt 染色。

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免疫组织化学(石蜡)图像 10

使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人黑色素瘤进行免疫组织化学分析。

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免疫印迹法图像 11

使用 Phospho-c-Raf (Ser259) Antibody (上图)或总 c-Raf antibody(下图)对未经处理或已经 TPA 处理的 HeLa 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 12

使用 Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb(上)或 GSK-3β (27C10) Rabbit mAb #9315(下)对未处理的或经 LY294002/渥曼青霉素处理的 PC-3 细胞提取物进行蛋白质印迹法分析。

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免疫印迹法图像 13

使用 Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAb (上图)、PDK1 Antibody #3062(中间)或 Akt Antibody #9272(下图)对未经处理或已经 λ-磷酸酶处理的 PC3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫沉淀图片 14

使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb (泳道 3)对 Jurkat 细胞提取物磷酸 Akt (Thr308) 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。

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免疫组织化学(石蜡)图像 15

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060,对经 SignalStain® Antibody Diluent #8112(左)和 TBST/5% Normal Goat Serum(右)对比处理的石蜡包埋人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

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免疫组织化学(石蜡)图像 16

在对照肽(左)或 Akt (pan) Blocking Peptide #1085(右)存在下,使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

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流式细胞术图像 17

使用 Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb 对未处理的(蓝色)或经 PDGF 处理(绿色)的 NIH/3T3 细胞进行流式细胞术分析。

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流式细胞术图像 18

使用 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb 对未经处理(蓝色)或已经 Human Platelet-Derived Growth Factor AA (hPDGF-AA) #8913(100 ng/ml,15 分钟;绿色)处理的血清饥饿 NIH/3T3 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #4414 作为二抗。

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免疫组织化学(石蜡)图像 19

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

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免疫组织化学(石蜡)图像 20

在 SignalSlide (TM) Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101 (石蜡包埋的 LNCaP 细胞(未处理(左)或 LY294002 处理(右)))上使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 进行免疫组织化学分析。

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IF-IC 图像 21

使用 Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb(绿色)对未处理(左)的、经 LY294002 和渥曼青霉素处理(分别为 #9901 和 #9951;中心)或经 λ 磷酸酶处理(右)的野生型小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)(顶排)、GSK-3β (-/-) MEF(中间排)或 PC-3 细胞(底排)进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。(MEF 野生型和 GSK-3β (-/-) 细胞由加拿大多伦多大学的 Jim Woodgett 博士友情提供)。

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IF-IC 图像 22

使用 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb (绿色)对经胰岛素(100 nM,15 分钟;左图)或 LY294002 #9901(50 μM,2 小时;右图)处理的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

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免疫组织化学(石蜡)图像 23

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对 SignalSlide® Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101(未经处理(左)或经 LY294002 处理(右)的石蜡包埋的 LNCaP 细胞)进行免疫组织化学分析。

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流式细胞术图像 24

使用与非特异性阴性对照抗体(红色)相对比的 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb(蓝色)对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。

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免疫组织化学(石蜡)图像 25

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

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IF-IC 图像 26

使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb(绿色)对 C2C12 细胞(LY294002 处理(左)或胰岛素处理(右))进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor555® Phalloidin(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5™(DNA 荧光染料)。

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免疫组织化学(石蜡)图像 27

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 PTEN 杂合突变小鼠子宫内膜进行免疫组织化学分析。(组织切片由 Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, Boston, MA 的 Sabina Signoretti 博士惠赠)

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免疫组织化学(石蜡)图像 28

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对未经处理(左)或经 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋的 U-87MG 异种移植物进行免疫组织化学分析。

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流式细胞术图像 29

使用非特异性阴性对照抗体(红色)作为对照组,Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对未经处理(绿色)或经 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903处理(蓝色)的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。

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IF-IC 图像 30

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(绿色),对经 LY294002 处理(左)或经胰岛素处理(右)的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5®#4084(DNA 荧光染料)。

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产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 4060 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
H M R Hm Mk Dm Z B 60 兔 IgG
Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 4691 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
H M R Mk Dm 60 兔 IgG
Phospho-c-Raf (Ser259) Antibody 9421 20 µl
  • WB
  • IP
H M R Mk X 74 兔 
Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb 5558 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
H M R Hm 46 兔 IgG
Phospho-PTEN (Ser380) Antibody 9551 20 µl
  • WB
  • IP
H M R 54 兔 
Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAb 3438 20 µl
  • WB
  • IP
H M R 58 to 68 兔 IgG
Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb 13038 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
H M R Mk 60 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
山羊 

Phospho-Akt Pathway Antibody Sampler Kit 提供一种高性价比的方式来评估 Akt 信号转导通路的激活状态,包括 PTEN 和磷酸化的 Akt、GSK-3β、c-Raf 和 PDK1。该试剂盒包含足量的一抗和二抗,可进行两次蛋白质印迹实验。

每种磷酸特异性抗体可识别其靶标的磷酸化形式。Akt Antibody 可识别在任何磷酸化状态下的 Akt 总蛋白。

使用与人 Akt 的 Ser473 或 Thr308、人 GSK-3ß 的 Ser9、人 c-Raf 的 Ser259、人 PTEN 的 Ser380 或人 PDK1 的 Ser241 周围的残基相对应的合成磷酸肽对兔进行免疫接种来产生抗体。使用蛋白 A 和肽亲和力色谱对多克隆抗体进行纯化。

Akt也称作 PKB 或 Rac,在控制存活和凋亡中发挥至关重要作用 (1-3)。这种蛋白激酶由胰岛素和多种生长和存活因子激活,并在涉及 PI3 激酶的 wortmannin 敏感通路中发挥作用 (2,3)。通过磷脂结合过程并由 PDK1 在 Thr308 位点磷酸化激活环 (4) ,以及通过羧基末端内部 Ser473 处的磷酸化激活 Akt。曾经功能难以捉摸的PDK2可在 Ser473 处磷酸化 Akt ,它被鉴定为在含 rictor 和 Sin1 的雷帕霉素中的非敏感复合体中哺乳动物雷帕霉素靶标(mTOR) (5,6)。Akt 通过磷酸化和失活几种靶标(包括 Bad (7)、叉头转录因子 (8)、c-Raf (9) 和caspase-9)而抑制凋亡,进而促进细胞存活。PTEN 磷酸酶是 PI3 激酶/Akt 信号转导通路的主要负向调节分子 (10)。LY294002 是特异性 PI3 激酶抑制剂 (11)。Akt 的另一个主要功能是通过磷酸化和失活 GSK-3α 和 β 调节糖原合成 (12,13)。Akt 还可以在胰岛素刺激转运葡萄糖中发挥作用 (12)。除其在存活和糖原合成中的作用外,Akt 还通过防止 GSK-3β 介导的磷酸化和cyclin D1 降解 (14),并通过负向调节细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 p27 Kip1 (15) 和 p21 Waf1/Cip1 (16),参与细胞周期调节。Akt 还通过直接磷酸化含有 raptor 的雷帕霉素敏感性复合体中的 mTOR,在细胞生长中发挥至关重要作用 (17)。更重要的是,Akt 磷酸化并失活结节蛋白 (TSC2)(在mTOR-raptor 复合体中 mTOR 的抑制分子)(18,19)。

  1. Franke, T.F. et al. (1997) Cell 88, 435-7.
  2. Burgering, B.M. and Coffer, P.J. (1995) Nature 376, 599-602.
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  19. Manning, B.D. et al. (2002) Mol Cell 10, 151-62.
Entrez-Gene Id
207 , 208 , 10000 , 5894 , 2932 , 5170 , 5728
Swiss-Prot Acc.
P31749 , P31751 , Q9Y243 , P04049 , P49841 , O15530 , P60484
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
第 7,429,487 号美国专利,外国对应物,以及由此而来的儿童专利。

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