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10396
Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit
一抗

Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit #10396

免疫印迹法图像 1

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(上)或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691(下),对未经处理或经 LY294002/Wortmannin 处理的 PC-3 细胞、经血清饥饿或 PDGF 处理的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 2

使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对重组 Akt1 蛋白、Akt2 蛋白和 Akt3 蛋白及来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 3

使用 Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP®Rabbit mAb (Akt1 Specific) # (上图) , Phospho-Akt2 (Ser474) (D3H2) Rabbit mAb (Akt2 Specific) (上方第 2 张图 ) 、Akt1 (C73H10) Rabbit mAb #2938 (中图) 、Akt2 (D6G4) Rabbit mAb #3063 (倒数第二个底图) 或 PI3 Kinase p85 (19H8) Rabbit mAb #4257 (底图) ,对转染表达 Akt1 shRNA 或 Akt2 shRNA 的表达载体的未经诱导 (-) 或经强力霉素诱导指定次数的 LNCaP 提取物进行蛋白印迹分析。 (感谢麻省波士顿贝斯以色列女执事医疗中心 (Beth Israel Deaconess Medical Center) 和哈佛医学院的 Rebecca Chin 博士及 Alex Toker 博士惠赠数据) 。

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免疫印迹法图像 4

使用 Akt1 (C73H10) Rabbit mAb,对来自不同细胞类型的提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 5

使用 Phospho-Akt2 (Ser474) (D3H2) Rabbit mAb (上图) 、Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP®Rabbit mAb #4060 (中图) 或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691 (下图) ,对未经处理 (-) 或经 Human Platelet-Derived Growth Factor AA (hPDGF-AA) #8913 (100ng/ml,15分钟 +) 处理的 Akt1 (-/-) 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 或 Akt2 (-/-) MEF 的提取物进行蛋白印迹分析。

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免疫印迹法图像 6

使用 Akt2 (D6G4) Rabbit mAb(上)和 Akt1 (C73H10) Rabbit mAb #2938(下),对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 7

一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

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免疫组织化学(石蜡)图像 8

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(左)或 PTEN (138G6) Rabbit mAb #9559(右),对石蜡包埋的 MDA-MB-468 异种移植物进行免疫组织化学分析。注意:PTEN 缺失型 MDA-MB-468 细胞存在 P-Akt 染色。

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免疫组织化学(石蜡)图像 9

使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人黑色素瘤进行免疫组织化学分析。

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免疫印迹法图像 10

使用 Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP®Rabbit mAb (Akt1 Specific) (上图) 、Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP®Rabbit mAb #4060 (中图) 及 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691 (下图) ,对 phospho-Akt1、 phospho-Akt2 及 phospho-Akt3 纯化重组蛋白进行蛋白印迹分析。

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免疫印迹法图像 11

使用 Akt1 (C73H10) Rabbit mAb(上)和 Akt2 Antibody #2962 (下),对来自 Akt1 敲除(泳道 1)、Akt2 敲除(泳道 2)和 Akt3 敲除(泳道 3)小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 和匹配的野生型 MEF(泳道 4)的提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 12

使用 Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP®Rabbit mAb (Akt1 Specific) #9018 (顶图) ,Phospho-Akt2 (Ser474) (D3H2) Rabbit mAb (Akt2 Specific) (上方第 2 张图) , Akt1 (C73H10) Rabbit mAb #2938 (中图) , Akt2 (D6G4) Rabbit mAb #3063 (倒数第二个底图) 或 PI3 Kinase p85 (19H8) Rabbit mAb #4257 (底图) ,对转染表达 Akt1 shRNA 或 Akt2 shRNA 的表达载体的未经诱导 (-) 或经强力霉素诱导指定次数的 LNCaP 细胞提取物进行蛋白印迹分析。 (感谢麻省波士顿贝斯以色列女执事医疗中心 (Beth Israel Deaconess Medical Center) 和哈佛医学院的 Rebecca Chin 博士及 Alex Toker 博士惠赠数据) 。

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免疫组织化学(石蜡)图像 13

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060,对经 SignalStain® Antibody Diluent #8112(左)和 TBST/5% Normal Goat Serum(右)对比处理的石蜡包埋人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

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免疫组织化学(石蜡)图像 14

在对照肽(左)或 Akt (pan) Blocking Peptide #1085(右)存在下,使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

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免疫印迹法图像 15

使用 Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP®Rabbit mAb (Akt1 Specific) (上图) 、Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP®Rabbit mAb #4060 (中图) 或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691 (下图) ,对未经处理或经 hPDGF #8913 (100ng/ml,15分钟) 激活的 Akt1 (-/-) 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 或 Akt2 (-/-) MEF 提取物进行蛋白印迹分析。

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免疫印迹法图像 16

使用 Akt1 (C73H10) Rabbit mAb(上)和 Akt (pan) (11E7) Rabbit mAb #4685(下),对重组 Akt1 蛋白、Akt2 蛋白和 Akt3 蛋白进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 17

使用 Phospho-Akt2 (Ser474) (D3H2) Rabbit mAb (Akt2 Specific) (上图) , Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060 (中图) 及 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691 (下图) ,对 phospho-Akt1, phospho-Akt2 及 phospho-Akt3 纯化重组蛋白进行蛋白印迹分析。

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免疫组织化学(石蜡)图像 18

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

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免疫组织化学(石蜡)图像 19

在 SignalSlide (TM) Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101 (石蜡包埋的 LNCaP 细胞(未处理(左)或 LY294002 处理(右)))上使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 进行免疫组织化学分析。

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流式细胞术图像 20

使用 Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP®Rabbit mAb (Akt1 Specific) ,对经 PDGF 处理 (100ng/mL,15分钟) 的 Akt1 (-/-) 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) (蓝色) 或 Akt2 (-/-) MEF (绿色) 进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L) , F (ab') 2Fragment (Alexa Fluor®488Conjugate) #4412用作二抗。

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免疫组织化学(石蜡)图像 21

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对 SignalSlide® Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101(未经处理(左)或经 LY294002 处理(右)的石蜡包埋的 LNCaP 细胞)进行免疫组织化学分析。

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流式细胞术图像 22

使用与非特异性阴性对照抗体(红色)相对比的 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb(蓝色)对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。

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IF-IC 图像 23

使用 Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP®Rabbit mAb (Akt1 Specific) (绿色) ,对经 hPDGF #8913 (100ng/ml,15分钟) 刺激 (顶行) 或经 LY294002 #9901抑制 (底行) 的 Akt1 (-/-) 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) (左栏) 或 Akt2 (-/-) MEF (右栏) 细胞进行共聚焦免疫荧光分析使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

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免疫组织化学(石蜡)图像 24

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

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IF-IC 图像 25

使用 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb(绿色)对 C2C12 细胞(LY294002 处理(左)或胰岛素处理(右))进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor555® Phalloidin(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5™(DNA 荧光染料)。

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免疫组织化学(石蜡)图像 26

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 PTEN 杂合突变小鼠子宫内膜进行免疫组织化学分析。(组织切片由 Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, Boston, MA 的 Sabina Signoretti 博士惠赠)

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免疫组织化学(石蜡)图像 27

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对未经处理(左)或经 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋的 U-87MG 异种移植物进行免疫组织化学分析。

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流式细胞术图像 28

使用非特异性阴性对照抗体(红色)作为对照组,Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对未经处理(绿色)或经 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903处理(蓝色)的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。

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IF-IC 图像 29

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(绿色),对经 LY294002 处理(左)或经胰岛素处理(右)的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5®#4084(DNA 荧光染料)。

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产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 4060 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
H M R Hm Mk Dm Z B 60 兔 IgG
Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 4691 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
H M R Mk Dm 60 兔 IgG
Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP® Rabbit mAb (Akt1 Specific) 9018 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
H M R 60 兔 IgG
Akt1 (C73H10) Rabbit mAb 2938 20 µl
  • WB
  • IP
H M R Mk 60 兔 IgG
Phospho-Akt2 (Ser474) (D3H2) Rabbit mAb (Akt2 Specific) 8599 20 µl
  • WB
  • IP
H M R 60 兔 IgG
Akt2 (D6G4) Rabbit mAb 3063 20 µl
  • WB
  • IP
H M R Mk 60 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
山羊 

Phospho-Akt Isoform Antibody Sampler Kit 为您提供了一种经济的手段以磷酸化特异的及对照抗体检测 Akt 家族成员的激活。该试剂盒含有足量的一抗,每种抗体至少可进行两次蛋白质印迹实验。

试剂盒中每个抗体可识别其内标水平的总特异性靶标蛋白。Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb 不会与其他相关蛋白发生交叉反应。Akt1 (C73H10) Rabbit mAb 不与 Akt2 或 Akt3 交叉反应。Akt2 (D6G4) Rabbit mA 不与 Akt1 或 Akt3 交叉反应。Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP®Rabbit mAb 检测仅在 Ser473 磷酸化后的内源水平的 Akt。Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP®Rabbit mAb (Akt1 Specific) 仅在 Ser473 位点磷酸化后可识别内源水平的 Akt1 蛋白。不能检测 Ser474 位点磷酸化的 Akt2 蛋白。Phospho-Akt2 (Ser474) (D3H2) Rabbit mAb (Akt2 Specific) 仅在 Ser474 磷酸化后可识别内源水平的 Akt2 蛋白。该抗体不与 Ser473 磷酸化的 Akt1 蛋白或 Ser472 磷酸化的 Akt3 蛋白发生交叉反应。

使用与人 Akt 中 Ser473 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb。使用与小鼠 Akt 羧基末端序列残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb。使用与人 Akt1 蛋白 Ser473 周围残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生 Phospho-Akt1 (Ser473) (D7F10) XP® Rabbit mAb (Akt1 Specific)。通过采用人 Akt1 的 Leu110 周围的合成肽对动物进行免疫接种来产生 Akt1 (C73H10) Rabbit mAb 单克隆抗体。使用与人 Akt2 蛋白 Ser474 周围残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生 Phospho-Akt2 (Ser474) (D3H2) Rabbit mAb (Akt2 Specific)。通过采用与人 Akt2 的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生 Akt2 (D6G4) Rabbit mAb。

Akt也称作 PKB 或 Rac,在控制存活和凋亡中发挥至关重要作用 (1-3)。这种蛋白激酶由胰岛素和多种生长和存活因子激活,并在涉及 PI3 激酶的 wortmannin 敏感通路中发挥作用 (2,3)。通过磷脂结合过程并由 PDK1 在 Thr308 位点磷酸化激活环 (4) ,以及通过羧基末端内部 Ser473 处的磷酸化激活 Akt。曾经功能难以捉摸的PDK2可在 Ser473 处磷酸化 Akt ,它被鉴定为在含 rictor 和 Sin1 的雷帕霉素中的非敏感复合体中哺乳动物雷帕霉素靶标(mTOR) (5,6)。Akt 通过磷酸化和失活几种靶标(包括 Bad (7)、叉头转录因子 (8)、c-Raf (9) 和caspase-9)而抑制凋亡,进而促进细胞存活。PTEN 磷酸酶是 PI3 激酶/Akt 信号转导通路的主要负向调节分子 (10)。LY294002 是特异性 PI3 激酶抑制剂 (11)。Akt 的另一个主要功能是通过磷酸化和失活 GSK-3α 和 β 调节糖原合成 (12,13)。Akt 还可以在胰岛素刺激转运葡萄糖中发挥作用 (12)。除其在存活和糖原合成中的作用外,Akt 还通过防止 GSK-3β 介导的磷酸化和cyclin D1 降解 (14),并通过负向调节细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 p27 Kip1 (15) 和 p21 Waf1/Cip1 (16),参与细胞周期调节。Akt 还通过直接磷酸化含有 raptor 的雷帕霉素敏感性复合体中的 mTOR,在细胞生长中发挥至关重要作用 (17)。更重要的是,Akt 磷酸化并失活结节蛋白 (TSC2)(在mTOR-raptor 复合体中 mTOR 的抑制分子)(18,19)。

在哺乳动物中,有 3 种 Akt 同工型(Akt1、Akt2 和 Akt3)(20)。Akt 激活需要 mTORC2 磷酸化 Akt1 Ser473、Akt2 Ser474 和 Akt3 Ser472 (20)。

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Entrez-Gene Id
207 , 208 , 10000
Swiss-Prot Acc.
P31749 , P31751 , Q9Y243
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

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