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9862
mTOR Substrates Antibody Sampler Kit

mTOR Substrates Antibody Sampler Kit #9862

免疫印迹法图像 1

使用 mTOR (7C10) Rabbit mAb 对 293、A431、COS、C6 和 C2C12 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 2

使用 Phospho-p70 S6 Kinase (Thr389) (108D2) Rabbit mAb(上),或 p70 S6 Kinase (49D7) rabbit mAb #2708 (下)对经血清饥饿或加有血清处理的 (20%) 293, NIH/3T3,和 PC12 细胞进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 3

Western blot analysis of lysates from unsynchronized (U) and nocodazole (N) treated (50ng/ml for 48 hours) HT29 cells using Phospho-p70 S6 Kinase (Ser371) Antibody (B) and p70 S6 Kinase Antibody #9202 (D).Western 转移后使用牛小肠碱性磷酸酶 (CIP) 孵育的硝酸纤维膜可消除 phospho-p70 S6 激酶信号 (A),但不影响总 p70 S6 激酶信号 (C)。

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免疫印迹法图像 4

使用 4E-BP1 Antibody #9452(上)和 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) Antibody #2855(下)对来自 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。细胞在无血清培养基中饥饿 24 小时并且给予氨基酸剥夺处理 1 小时。补充氨基酸 1 小时。随后,不处理 (-) 或用 100 nM 胰岛素处理 (+) 细胞 30 分钟。

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免疫印迹法图像 5

使用 Phospho-mTOR (Ser2448 位点) (D9C2) XP® Rabbit mAb(上)或 mTOR (7C10) Rabbit mAb #2983 对未经处理或经胰岛素单独处理(150 nM,5 分钟)或经胰岛素结合 λ 磷酸酶处理的血清饥饿 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 6

一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

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免疫印迹法图像 7

使用 mTOR (7C10) Rabbit mAb #2983 和 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125 对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Fluorescein Conjugate) #6201 (-) 或 SignalSilence® mTOR siRNA II (+) 转染的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。mTOR (7C10) Rabbit mAb 可确认 mTOR 的沉默表达,而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 则被用于对照 mTOR siRNA 上样和特异性。

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免疫印迹法图像 8

使用Phospho-p70 S6 Kinase (Ser371) Antibody (上) 或 p70 S6 Kinase Antibody #9202 (下) 对先经低血清中培养生长,, 随后于 20% 血清中单独处理30分钟,或经与 rapamycin (10nM) #9904 或 LY294002 (50uM) #9901 预孵育1小时的 293 细胞裂解物进行蛋白质印迹分析。

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免疫组织化学(石蜡)图像 9

使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。

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IF-IC 图像 10

使用 Phospho-mTOR (Ser2448 位点) (D9C2) XP® Rabbit mAb(绿色) 对经 rapamycin 处理(#9904,10 μM,2 小时,左)、胰岛素处理(150 nM,6 分钟,中)或胰岛素结合 λ 磷酸酶处理(右)的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。用 DY-554 phalloidin 对肌动蛋白丝进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

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免疫组织化学(石蜡)图像 11

使用 mTOR (7C10) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌(可显示细胞质定位)进行免疫组织化学分析。

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免疫组织化学(石蜡)图像 12

使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) 兔单抗对石蜡包埋的人淋巴瘤进行免疫组织化学分析。

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免疫组织化学(石蜡)图像 13

在对照肽(左图)或 mTOR Blocking Peptide #1072(右图)存在的情况下,使用 mTOR (7C10) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

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免疫组织化学(石蜡)图像 14

在 SignalSlide (TM) Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101 (石蜡包埋的未经处理(左)或经 LY294002 处理(右) 的LNCaP 细胞)上使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb 进行免疫组织化学分析。

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免疫组织化学(石蜡)图像 15

使用 mTOR (7C10) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠脑进行免疫组织化学分析。

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免疫组织化学(石蜡)图像 16

在对照肽(左)或 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) Blocking Peptide #1052(右)的存在下,使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。

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流式细胞术图像 17

使用非特异性阴性对照抗体(红色)和 mTOR (7C10) Rabbit mAb(蓝色),对 293 细胞进行流式细胞分析。

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流式细胞术图像 18

使用与非特异性阴性对照抗体(红色)作对比的 Phospho-4E-BP1 (Thr36/46) (236B4) Rabbit mAb,对未经处理(绿色)或经 LY294002、Wortmannin 和 U0126 处理的(蓝色) Jurkat 细胞进行流式细胞分析。

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IF-IC 图像 19

使用 mTOR (7C10) Rabbit mAb(绿色)对小鼠胚胎成纤维 (MEF) 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

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IF-IC 图像 20

使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb(绿色),对表达非靶向性 shRNA(底部)或靶向 4E-BP1/2 的 shRNA(顶部)的 293 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。为证实磷酸特异性,细胞以 LY294002 #9901、U0126 #9903 和 Rapamycin #9904(50 μM;10 μm;10 nM;2小时)(左)组成的抑制剂混合物处理、胰岛素 (100 nM,30 分钟;中间)刺激、或胰岛素刺激后(右)用λ-磷酸酶处理。红色 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution (#4087)。

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产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
mTOR (7C10) Rabbit mAb 2983 20 µl
  • WB
  • IHC
  • IF
  • F
H M R Mk 289 兔 IgG
Phospho-p70 S6 Kinase (Thr389) (108D2) Rabbit mAb 9234 20 µl
  • WB
H M R Mk 70, 85 兔 IgG
Phospho-p70 S6 Kinase (Ser371) Antibody 9208 20 µl
  • WB
H M R Mk 70, 85 兔 
Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb 2855 20 µl
  • WB
  • IHC
  • IF
  • F
H M R Mk Dm 15 to 20 兔 IgG
Phospho-mTOR (Ser2448) (D9C2) XP® Rabbit mAb 5536 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
H M R Mk 289 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
山羊 

mTOR Substrates Antibody Sampler Kit 为您提供一种高性价比的方式来评估 mTOR 信号转导至下游底物(包括 p70 S6 激酶和 4E-BP1)。试剂盒包含够量的一抗和二抗,可针对每种一抗进行 2 次蛋白质印迹实验。

mTOR Substrates Antibody Sampler Kit 中的每个抗体均可检测其靶标蛋白的内源水平。激活状态抗体通常只检测在指定残基磷酸化的靶标蛋白,但在类似位点磷酸化的相关蛋白也有可能发生交叉反应。

使用与人 p70 S6 激酶的 Ser371 位点周围残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。使用蛋白 A 和肽亲和力色谱对多克隆抗体进行纯化。使用与人 p70 S6 激酶 的 Thr389 位点、小鼠 4E-BP1 的 Thr37 位点和 Thr46 位点,以及人mTOR 的 Ser2448 位点周围残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生磷酸特异性兔单克隆抗体。使用与人 mTOR 的 Ser2481 位点周围残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生 mTOR (7C10) 单克隆抗体。

哺乳动物 rapamycin 靶标蛋白 (mTOR, FRAP, RAFT) 是一种 Ser/Thr 蛋白激酶 (1-3),可作为ATP 和氨基酸的感受器来平衡营养可用性和细胞生长 (4,5)。当有足够的营养可用时,mTOR 响应磷脂酸介导的信号,将正向信号传送到 p70 S6 激酶,并参与 eIF4E 抑制因子 4E-BP1 的失活 (6)。这些活动可导致特定 mRNA 亚群的翻译。mTOR 通过 PI3 激酶/Akt 信号转导通路在 Ser2448 位点被磷酸化,并在 Ser2481 位点自磷酸化 (7,8)。mTOR 在细胞生长和稳态中发挥着重要作用,并且可能在肿瘤中受到异常调节。基于这些原因,人们目前正在将 mTOR 作为抗癌治疗的潜在靶标进行研究 (9)。

mTOR (Raptor) 的调节相关蛋白与 mTOR 相互作用以介导 mTOR 信号转导至下游靶标 (10,11)。Raptor 通过其 TOR 信号转导 (TOS) 基序 与 mTOR 底物(例如 4E-BP1 和 p70 S6 激酶)结合,从而对 mTOR 介导的底物磷酸化必不可少 (12,13)。FKBP12-rapamycin 复合体与 mTOR 结合可抑制 mTOR-raptor 相互作用,这表明雷帕霉素具有抑制 mTOR 信号转导的机制 (14)。该 mTOR-raptor 相互作用以及其由营养和/或 rapamycin 进行的调节都依赖于被称为 GβL 的蛋白 (15)。GβL 是 mTOR 和 rictor(mTOR 的 rapamycin 不敏感伴侣)之间的雷帕霉素不敏感复合体的一部分,可能介导 rictor-mTOR 信号转导到 PKCα 和其他下游靶标 (16)。Rictor-mTOR 复合体已被确认为以前难以捉摸的 PDK2,可导致 Akt/PKB 在 Ser473 位点的磷酸化,这对 Akt/PKB 在 Thr308 位点的 PDK1 磷酸化和 Akt/PKB 的完全激活必不可少 (17)。

  1. Sabers, C.J. et al. (1995) J Biol Chem 270, 815-22.
  2. Brown, E.J. et al. (1994) Nature 369, 756-8.
  3. Sabatini, D.M. et al. (1994) Cell 78, 35-43.
  4. Gingras, A.C. et al. (2001) Genes Dev 15, 807-26.
  5. Dennis, P.B. et al. (2001) Science 294, 1102-5.
  6. Fang, Y. et al. (2001) Science 294, 1942-5.
  7. Navé, B.T. et al. (1999) Biochem J 344 Pt 2, 427-31.
  8. Peterson, R.T. et al. (2000) J Biol Chem 275, 7416-23.
  9. Huang, S. and Houghton, P.J. (2003) Curr Opin Pharmacol 3, 371-7.
  10. Sarbassov, D.D. et al. (2005) Science 307, 1098-101.
  11. Hara, K. et al. (2002) Cell 110, 177-89.
  12. Kim, D.H. et al. (2002) Cell 110, 163-75.
  13. Beugnet, A. et al. (2003) J Biol Chem 278, 40717-22.
  14. Nojima, H. et al. (2003) J Biol Chem 278, 15461-4.
  15. Oshiro, N. et al. (2004) Genes Cells 9, 359-366.
  16. Kim, D.H. et al. (2003) Mol. Cell 11, 895-904.
  17. Sarbassov, D.D. et al. (2004) Curr. Biol. 14, 1296-1302.
Entrez-Gene Id
1978 , 2475 , 6198
Swiss-Prot Acc.
Q13541 , P42345 , P23443
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
第 7,429,487 号美国专利,外国对应物,以及由此而来的儿童专利。

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