对促销感兴趣? | 点击此处 >>
47928
Mouse Reactive Necroptosis Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合

Mouse Reactive Necroptosis Antibody Sampler Kit #47928

引用 (0)

对经 Z-VAD(OMe)-FMK #60332(20 μM,30分钟)然后由 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/ml,2小时)和 SM-164(100 nM,2小时)处理的 L-929 细胞提取物的 phospho-RIP (Ser166) 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% Input,泳道 2 为兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900,泳道 3 为 Phospho-RIP (Ser166) (E7G6O) Rabbit mAb。使用 Phospho-RIP (Ser166) (E7G6O) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。

采用 Phospho-RIP (Ser166) (E7G6O) Rabbit mAb(上图)、RIP (D94C12) XP® Rabbit mAb #3493(中图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经处理 (-) 或用 Z-VAD(OMe)-FMK #60332 (20 μM,30 分钟)处理然后用 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/ml,7 小时)和 SM-164(100 nM,7小时)处理的野生型 (WT) MEF 或 MEF/RIPK1 敲除 (KO) 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。MEF/RIPK1 KO 细胞由马萨诸塞州波士顿哈佛医学院的 Junying Yuan 博士惠赠。

使用 RIP (D94C12) XP® Rabbit mAb(蓝色)对照 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(红色)对 MCF7 细胞进行流式细胞术分析。

使用 Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) 兔单克隆抗体(绿色)对未处理的(左图)、经 Z-VAD(20 μM,30 分钟)预处理后再经 SM-164 (100 nM) 和 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/mL,2.25 小时;中间)处理,或经 Z-VAD 预处理后再经 SM-164 和 hTNF-α 处理,随后经 λ 磷酸酶处理(右图)的 L-929 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。

对 L-929 细胞提取物 RIP3 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 RIP3 (D8J3L) Rabbit mAb。使用 RIP3 (D8J3L) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。构象特异性二抗用于避免与 IgG 的交叉反应性。

使用 Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb(绿色)对未处理的(左图)、已经 Z-VAD(20 μM,30 分钟)预处理后再用 SM-164 (100 nM) 和 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/mL,2.5 小时;中间)处理,随后用 λ 磷酸酶处理(右图)的 L-929 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。红色 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087(DNA 荧光染料)。

对 BaF3 细胞的 MLKL 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control # 3900 进行免疫沉淀,泳道 3 为 MLKL (D6W1K) Rabbit mAb (Mouse Specific)。使用 MLKL (D6W1K) Rabbit mAb (Mouse Specific) 进行蛋白质印迹分析。

一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

使用 Phospho-RIP (Ser166) (E7G6O) Rabbit mAb(上图)、RIP (D94C12) XP® Rabbit mAb #3493(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对未经处理 (-) 或经 Z-VAD(OMe)-FMK #60332(20 μM,30 分钟)处理然后经 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/ml,适用时间)和 SM-164(100 nM,适用时间)对 L-929 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 RIP (D94C12) XP® Rabbit mAb(绿色)对 OVCAR8 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

对未经处理 (-) 或经下列组合方法处理的 L-929 细胞进行蛋白质印迹分析: Z-VAD(20 μM,先于其他混合物 30 分钟添加;+)、SM-164(100 nM,3 小时;+)和小鼠 TNF-α(20 ng/ml,3 小时;+),使用 Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) 兔单克隆抗体(上图)、RIP3 (D8J3L) 兔单克隆抗体#15828(中间)或β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体#8457(下图)。

使用 RIP3 (D8J3L) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或转染全长小鼠 RIP3 (mRIP3; +) 表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

对未经处理 (-) 或经下列组合方法处理的 L-929 细胞进行蛋白质印迹分析: Z-VAD(20 μM,先于其他混合物 30 分钟添加;+)、Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/ml,4 小时;+)、SM-164(100 nM,4 小时;+)和 necrostatin-1(Nec-1,50 μM,4 小时;+),使用 Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb(上图)、总 MLKL (D6W1K) Rabbit mAb (Mouse Specific) #37705(中间)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)

使用 MLKL (D6W1K) Rabbit mAb (Mouse Specific) 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

采用 Phospho-RIP (Ser166) (E7G6O) Rabbit mAb(上图)、RIP (D94C12) XP® Rabbit mAb #3493(中图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经处理 (-) 或用 Z-VAD(OMe)-FMK #60332 (20 μM,30 分钟)处理然后用 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/ml,4.5 小时)和 SM-164(100 nM,4.5小时)处理的 H9c2(2-1) 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 RIP (D94C12) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 RIP3 (D8J3L) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 RIP (D94C12) XP® Rabbit mAb 对未转染或转染人 RIP 表达载体的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 RIP3 (D8J3L) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对野生型 (+) 或 RIP3 敲除型 (-) 小鼠脾脏细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。数据由马萨诸塞州波士顿哈佛大学医学院的 Junying Yuan 博士惠赠。

购买 # 47928T
产品货号 规格 价格 库存
47928T
1 个试剂盒(6 x 20 µl)

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
Phospho-RIP (Ser166) (E7G6O) Rabbit mAb 53286 20 µl
  • WB
  • IP
M R 78 兔 IgG
RIP (D94C12) XP® Rabbit mAb 3493 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
H M R Hm Mk 78 兔 IgG
Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) Rabbit mAb 91702 20 µl
  • WB
  • IF
M 46-62 兔 IgG
RIP3 (D8J3L) Rabbit mAb 15828 20 µl
  • WB
  • IP
M R 46-62 兔 IgG
Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb 37333 20 µl
  • WB
  • IF
M 54 兔 IgG
MLKL (D6W1K) Rabbit mAb (Mouse Specific) 37705 20 µl
  • WB
  • IP
M 54 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
山羊 

产品说明

小鼠 Necroptosis Antibody Sampler Kit 是一种经济合算的方法,可用来检测与坏死性凋亡有关的总蛋白和磷酸化蛋白。该试剂盒包含的抗体足以针对每种一抗进行两次蛋白质印迹分析。

特异性/敏感性

小鼠 Necroptosis Antibody Sampler Kit 中的每种抗体均可检测其靶标蛋白的内源水平。Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) Rabbit mAb 可检测仅在 Thr231 或 Ser232 位点被磷酸化后的 RIP3 蛋白。

来源/纯化

使用与人 RIP 的 Leu190、小鼠 RIP3 的 His411 和小鼠 MLKL 蛋白的羧基末端附近的残基相对应的合成肽,对兔子进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与小鼠 RIP 的 Ser166、小鼠 RIP3 的 Thr231/Ser232 和小鼠 MLKL 蛋白 Ser345 的相对应的合成磷酸肽,对兔子进行免疫接种来产生磷酸特异性单克隆抗体。

背景

坏死性凋亡是一个坏死性细胞死亡的调控通路,肿瘤坏死因子 (TNF) 家族的细胞因子、病原体感应蛋白(如 toll 样受体 (TLR))和缺血性损伤以及神经退行性疾病等许多炎症信号都会诱发坏死性凋亡 (1-3)。这个过程由 caspase 负调控,并由含有 RIP 和 RIP3 激酶的复合体(通常称为坏死体)启动。RIP 的小分子抑制因子 necrostatin-1 (Nec-1) 会抑制坏死性凋亡 (4)。RIP 在激酶结构域中对 Nec-1 敏感的多个位点被磷酸化,这些位点包括 Ser14、Ser15、Ser161 和 Ser166 (5)。在坏死性凋亡中,RIP3 在 Ser227 位点被磷酸化,这会募集 MLKL 并导致其在 Thr357 和 Ser358 位点的磷酸化 (6)。MLKL 磷酸化会导致其低聚化并转位到质膜,从而影响膜完整性 (7-10)。

在小鼠中,RIP3 的激活与在 Thr231 和 Ser232(11)位点的磷酸化有关,然后 MLKL 在 Ser345 位点通过 RIP3(12)磷酸化。

  1. Christofferson, D.E. and Yuan, J. (2010) Curr Opin Cell Biol 22, 263-8.
  2. Kaczmarek, A. et al. (2013) Immunity 38, 209-23.
  3. Zhou, W. and Yuan, J. (2014) Semin Cell Dev Biol 35, 14-23.
  4. Degterev, A. et al. (2008) Nat Chem Biol 4, 313-21.
  5. Ofengeim, D. and Yuan, J. (2013) Nat Rev Mol Cell Biol 14, 727-36.
  6. Sun, L. et al. (2012) Cell 148, 213-27.
  7. Cai, Z. et al. (2014) Nat Cell Biol 16, 55-65.
  8. Chen, X. et al. (2014) Cell Res 24, 105-21.
  9. Wang, H. et al. (2014) Mol Cell 54, 133-46.
  10. Dondelinger, Y. et al. (2014) Cell Rep 7, 971-81.
  11. Chen, W. et al. (2013) J Biol Chem 288, 16247-61.
  12. Murphy, J.M. et al. (2013) Immunity 39, 443-53.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。

Powered by Translations.com GlobalLink OneLink SoftwarePowered By OneLink