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48734
Mouse Reactive Cell Death and Autophagy Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合

Mouse Reactive Cell Death and Autophagy Antibody Sampler Kit #48734

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使用与非特异性的阴性对照抗体(红色)作为 Caspase-3(Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 的对照,对未经(蓝色)或已经(绿色)etoposide #2200 处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞术分析。

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使用 Cleaved PARP (Asp214) (D6X6X) Rabbit mAb (Rodent Specific)(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线),对未经(蓝色)或已经 Staurosporine #9953(1 μM,3 小时;绿色)处理的血清饥饿 Neuro-2a 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

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对经 Z-VAD(OMe)-FMK #60332(20 μM,30分钟)然后由 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/ml,2小时)和 SM-164(100 nM,2小时)处理的 L-929 细胞提取物的 phospho-RIP (Ser166) 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% Input,泳道 2 为兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900,泳道 3 为 Phospho-RIP (Ser166) (E7G6O) Rabbit mAb。使用 Phospho-RIP (Ser166) (E7G6O) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。

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采用 Phospho-RIP (Ser166) (E7G6O) Rabbit mAb(上图)、RIP (D94C12) XP® Rabbit mAb #3493(中图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经处理 (-) 或用 Z-VAD(OMe)-FMK #60332 (20 μM,30 分钟)处理然后用 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/ml,7 小时)和 SM-164(100 nM,7小时)处理的野生型 (WT) MEF 或 MEF/RIPK1 敲除 (KO) 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。MEF/RIPK1 KO 细胞由马萨诸塞州波士顿哈佛医学院的 Junying Yuan 博士惠赠。

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使用 Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) 兔单克隆抗体(绿色)对未处理的(左图)、经 Z-VAD(20 μM,30 分钟)预处理后再经 SM-164 (100 nM) 和 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/mL,2.25 小时;中间)处理,或经 Z-VAD 预处理后再经 SM-164 和 hTNF-α 处理,随后经 λ 磷酸酶处理(右图)的 L-929 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。

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使用 Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb(绿色)对未处理的(左图)、已经 Z-VAD(20 μM,30 分钟)预处理后再用 SM-164 (100 nM) 和 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/mL,2.5 小时;中间)处理,随后用 λ 磷酸酶处理(右图)的 L-929 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。红色 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087(DNA 荧光染料)。

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使用 Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经 (-) 或经Lipopolysaccharides (LPS) #14011(50 ng/ml,4 小时;+)处理后再用 Nigericin (sodium salt) #66419(15 μM,指定时间;+)处理的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的提取物进行蛋白质印迹分析。

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对经 LPS #14011(50 ng/ml,4 小时)处理,然后用尼日利亚菌素(15 μM,45 分钟)处理的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的培养基提取物中剪切活化的 IL-1β (Asp117) 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入,泳道 2 为兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900,泳道 3 为 Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) 兔单克隆抗体(特定小鼠)。使用 Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) 兔单克隆抗体(特定小鼠)进行蛋白印迹实验。抗兔 IgG, HRP-链接抗体 #7074 用作二抗。

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使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体(绿色)和 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457(红色)对未处理的(左图)、用 EBSS 营养饥饿(2 小时;中间)或用氯喹 处理(50 μM,24 小时;右图)的 MIA PaCa-2(上图)和 C2C12(下图)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色 = Hoechst 33342 #4082(DNA 荧光染料)。

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使用 SQSTM1 (D6M5X) Rabbit mAb(绿色)对未经(左图)或已经 Chloroquine #14774(50 μM,18 小时;中间)处理的野生型 MEF 和经 氯喹 处理(右图)的 SQSTM1/p62 敲除型 MEF 进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。MEF SQSTM1/p62 KO 细胞由马萨诸塞州波士顿哈佛大学医学院的 Junying Yuan 博士提供。

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一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

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使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb(绿色)标记的且未经(左)或经(右)Staurosporine #9953 处理的 HT-29 细胞的共聚焦免疫荧光图像。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

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使用 Cleaved PARP (Asp214) (D6X6X) Rabbit mAb (Rodent Specific)(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线),对未经(蓝色)或已经 Staurosporine #9953(1 μM,3 小时;绿色)处理的血清饥饿 H-4-II-E 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

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使用 Phospho-RIP (Ser166) (E7G6O) Rabbit mAb(上图)、RIP (D94C12) XP® Rabbit mAb #3493(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对未经处理 (-) 或经 Z-VAD(OMe)-FMK #60332(20 μM,30 分钟)处理然后经 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/ml,适用时间)和 SM-164(100 nM,适用时间)对 L-929 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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对未经处理 (-) 或经下列组合方法处理的 L-929 细胞进行蛋白质印迹分析: Z-VAD(20 μM,先于其他混合物 30 分钟添加;+)、SM-164(100 nM,3 小时;+)和小鼠 TNF-α(20 ng/ml,3 小时;+),使用 Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) 兔单克隆抗体(上图)、RIP3 (D8J3L) 兔单克隆抗体#15828(中间)或β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体#8457(下图)。

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对未经处理 (-) 或经下列组合方法处理的 L-929 细胞进行蛋白质印迹分析: Z-VAD(20 μM,先于其他混合物 30 分钟添加;+)、Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/ml,4 小时;+)、SM-164(100 nM,4 小时;+)和 necrostatin-1(Nec-1,50 μM,4 小时;+),使用 Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb(上图)、总 MLKL (D6W1K) Rabbit mAb (Mouse Specific) #37705(中间)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)

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使用 Cleaved-IL-1β (Asp117) (D7V2A) 兔单克隆抗体(特定小鼠)(上图)或总 IL-1β (D3H1Z) 兔单克隆抗体(特定小鼠)#12507(下图)对未经 (-) 或已经 LPS #14011(50 ng/ml,4 小时)处理后用尼日利亚菌素(15 μM,45 分钟)处理 (+) 的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的细胞提取物和培养基进行蛋白印迹分析。

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使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。

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使用 SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific) 对石蜡包埋的 MEF 野生型细胞沉淀物(左图,阳性)或 MEF SQSTM1/p62 KO 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。MEF SQSTM1/p62 KO 细胞由马萨诸塞州波士顿哈佛大学医学院的 Junying Yuan 博士提供。

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在对照肽(左)或 Cleaved Caspase-3 (Asp175) Blocking Peptide (#1050)(右)存在的情况下,使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠胚胎进行免疫组织化学分析。

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使用 Cleaved PARP (Asp214) (D6X6X) Rabbit mAb (Rodent Specific)(绿色),对未经(左图,阴性)或经 Staurosporine #9953(1 μM, 3小时,右图,阳性)处理的 Neuro-2a 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight554™13054 Phalloidin #(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

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采用 Phospho-RIP (Ser166) (E7G6O) Rabbit mAb(上图)、RIP (D94C12) XP® Rabbit mAb #3493(中图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经处理 (-) 或用 Z-VAD(OMe)-FMK #60332 (20 μM,30 分钟)处理然后用 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/ml,4.5 小时)和 SM-164(100 nM,4.5小时)处理的 H9c2(2-1) 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体对石蜡包埋的人食管癌细胞进行免疫组织化学分析。

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使用 SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific) 对石蜡包埋的小鼠前胃细胞进行免疫组织化学分析。

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使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对 SignalSlide® Cleaved Caspase-3 IHC Controls #8104(石蜡包埋的 Jurkat 细胞,未经(左)或经(右)etoposide 处理进行免疫组织化学分析。

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使用 Cleaved PARP (Asp214)(D6X6X) mAb (Rodent Specific) 对未经(左图,阴性)或已经 Staurosporine #9953(右图,阳性)处理的石蜡包埋的 3T3 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。

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使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。

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使用 SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific) 对石蜡包埋的小鼠肾脏细胞进行免疫组织化学分析。

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使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb,对石蜡包埋的小鼠胚胎进行免疫组织化学染色,以显示凋亡细胞细胞浆定位。

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使用 Cleaved PARP (Asp214)(D6X6X) mAb (Rodent Specific) 对石蜡包埋的 E14 大鼠胚胎细胞进行免疫组织化学分析。

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使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体对石蜡包埋的人非霍奇金氏淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。

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使用 SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific) 对石蜡包埋的小鼠脾细胞进行免疫组织化学分析。

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使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对未经或经 etoposide(25uM, 5 小时)处理的 Jurkat 细胞的提取物进行免疫沉淀法。使用同一抗体进行蛋白质进行印迹分析。

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使用 Cleaved PARP (Asp214)(D6X6X) mAb (Rodent Specific) 对未经(左图,阴性)或已经 Staurosporine #9953(右图,阳性)处理的石蜡包埋的 H-4-II-E 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。

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对用氯喹 # 14774(50 μM;过夜)处理的 HeLa 细胞的 LC3B 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 敲入,泳道 2 为小鼠 (G3A1) 单克隆抗体 IgG1 同型对照,泳道 3 为 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体。使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体进行蛋白印迹实验。Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody #7076 用作二抗。

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使用 SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific) 对石蜡包埋的大鼠脾细胞进行免疫组织化学分析。

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使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对未经或经 staurosporine #9953(1uM,3 小时)或 etoposide #2200(25uM,5 小时)处理的 C6(大鼠)、NIH/3T3(小鼠)和 Jurkat(人源)提取物进行蛋白质印迹分析。

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使用 Cleaved PARP (Asp214)(D6X6X) mAb (Rodent Specific) 对石蜡包埋的小鼠卵巢细胞进行免疫组织化学分析。

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使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体(上图)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457(下图)对未经 (-) 或已经氯喹 #14774(50 μM,过夜;+)处理的 HeLa、C2C12 和 KNRK 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。

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使用 SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific) 对石蜡包埋的小鼠小肠细胞进行免疫组织化学分析。

other Image 41 - Mouse Reactive Cell Death and Autophagy Antibody Sampler Kit

使用 Cleaved PARP (Asp214)(D6X6X) mAb (Rodent Specific) 对石蜡包埋的小鼠脾进行免疫组织化学分析。

other Image 42 - Mouse Reactive Cell Death and Autophagy Antibody Sampler Kit

使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体(上图)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457(下图)对 HeLa 细胞或已敲除 LC3B 的 HeLa 细胞 (HeLa/LC3B KO) 的提取物进行蛋白印迹分析。

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对 L-929 细胞提取物的 QSTM1 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific)。使用 SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific) 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。

other Image 44 - Mouse Reactive Cell Death and Autophagy Antibody Sampler Kit

对经 Staurosporine #9953(1 μM,3 小时)处理的 Neuro-2a 细胞提取物的裂解活化 PARP (Asp214) 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Cleaved PARP (Asp214) (D6X6X) Rabbit mAb (Rodent Specific)。使用 Cleaved PARP (Asp214) (D6X6X) Rabbit mAb (Rodent Specific) 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。

other Image 45 - Mouse Reactive Cell Death and Autophagy Antibody Sampler Kit

使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体(上图)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体(下图)对未处理的 (-) 或用 Earle's 平衡盐溶液 (EBSS)(规定时间)饥饿的 A549 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。

other Image 46 - Mouse Reactive Cell Death and Autophagy Antibody Sampler Kit

使用 SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific)(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对野生型或 SQSTM1/p62 敲除型小鼠的 MEF 提取物进行蛋白质印迹分析。MEF SQSTM1/p62 KO 细胞由马萨诸塞州波士顿哈佛大学医学院的 Junying Yuan 博士提供。

other Image 47 - Mouse Reactive Cell Death and Autophagy Antibody Sampler Kit

使用 Cleaved PARP (Asp214) (D6X6X) Rabbit mAb (Rodent Specific)(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对未经 (-) 或已经 Staurosporine #9953(1 μM,3 小时)处理的血清饥饿 Neuro-2a 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

other Image 48 - Mouse Reactive Cell Death and Autophagy Antibody Sampler Kit

使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体(上图)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457(下图)对未处理的 (-) 或已经 Torin 1 #14379(250 nM,5 小时;+)处理的 MCF7 和 Raji 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。

other Image 49 - Mouse Reactive Cell Death and Autophagy Antibody Sampler Kit

使用 SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific)(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对未经处理的 (-) 或经氯奎宁 #14774(50 μM,过夜)处理的 C2C12 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

other Image 50 - Mouse Reactive Cell Death and Autophagy Antibody Sampler Kit

使用 Cleaved PARP (Asp214) (D6X6X) Rabbit mAb (Rodent Specific)(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对未经 (-) 或已经 Staurosporine #9953(1 μM,6 小时;+)处理的血清饥饿 H-4-II-E 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

other Image 51 - Mouse Reactive Cell Death and Autophagy Antibody Sampler Kit

使用 SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific) 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

other Image 52 - Mouse Reactive Cell Death and Autophagy Antibody Sampler Kit

使用 SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific)(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对未经处理的 (-) 或经 Earles 基础盐溶液(EBSS;4 小时;+)处理的 MEF 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

购买 # 48734T
产品货号 规格 价格 库存
48734T
1 个试剂盒(9 x 20 µl)

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 9664 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
H M R Mk 17, 19 兔 IgG
Cleaved PARP (Asp214) (D6X6X) Rabbit mAb (Rodent Specific) 94885 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
M R 89 兔 IgG
Phospho-RIP (Ser166) (E7G6O) Rabbit mAb 53286 20 µl
  • WB
  • IP
M R 78 兔 IgG
Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) Rabbit mAb 91702 20 µl
  • WB
  • IF
M 46-62 兔 IgG
Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb 37333 20 µl
  • WB
  • IF
M 54 兔 IgG
Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb 10137 20 µl
  • WB
M 31 兔 IgG
Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) Rabbit mAb (Mouse Specific) 63124 20 µl
  • WB
  • IP
M 17 兔 IgG
LC3B (E5Q2K) Mouse mAb 83506 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
H M R 14, 16 小鼠 IgG2b
SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific) 23214 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
M R 62 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
山羊 

产品说明

Mouse Reactive Cell Death and Autophagy Antibody Sampler Kit 提供了一种经济的方法来检测细胞凋亡、坏死性凋亡、细胞焦亡和自噬中的常见读出。该试剂盒包含的抗体足以使用每种一抗进行两次蛋白印迹实验。

特异性/敏感性

Mouse Reactive Cell Death 和 Autophagy Antibody Sampler Kit 中的每种抗体均可检测其靶标蛋白的内源水平。Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 可检测 Asp175 附近裂解活化产生的内源水平的活化 caspase-3 中大片段 (17/19 kDa) 。该抗体无法检测全长 caspase-3 或其他剪切的半胱天冬酶。Cleaved PARP (Asp214) (D6X6X) Rabbit mAb (Rodent Specific) 可识别仅在 Asp214 位点被裂解活化的内源水平的啮齿动物 PARP 大片段 (89 kDa)。仅当在 Asp276 位点裂解时,Cleaved Gasdermin D (Asp276) (E3E3P) Rabbit mAb 才可检测小鼠 Gasdermin D 蛋白的内源水平。Cleaved-IL-1β (Asp117) (E7V2A) 兔单克隆抗体(特定小鼠)可检测仅在 Asp117 位点被剪切活化的小鼠 IL-1β 蛋白的内源水平。Phospho-RIP3 (Thr231/Ser232) (E7S1R) 兔单克隆抗体可检测仅在 Thr231/Ser232 位点被磷酸化的 RIP3 蛋白的内源水平。该抗体可能无法检测仅在 Thr231 或 Ser232 被单磷酸化的 RIP3。Phospho-RIP (Ser166) (E7G6O) Rabbit mAb 仅在 RIP 蛋白在 Ser166 位点被磷酸化时方可识别内源水平的 RIP 蛋白。仅当 MLKL 蛋白在 Ser345 位点被磷酸化时,Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAb 才可检测小鼠 MLKL 蛋白的内源水平。在免疫荧光 (IF-IC) 实验中观察到微弱、非特异性胞核染色。LC3B (E5Q2K) Mouse mAb 可检测 LC3B 的 I 型和 II 型。检测不到与其他家族成员的交叉反应性。SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific) 可识别内源水平的啮齿类 SQSTM1/p62 总蛋白。

来源/纯化

使用与人 caspase-3 的 Asp175、啮齿动物 PARP 的 Asp214、小鼠 Gasdermin D 的 Asp276、小鼠 IL-1β 的 Asp117、小鼠 SQSTM1/p62 的 Gly300 周围残基、人 LC3B 氨基末端附近的残基相对应的合成肽以及鼠 RIP 的 Ser166、鼠 RIP3 的 Thr231/Ser232、鼠 MLKL 的 Ser345 相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

已根据不同的形态学和生化途径对受调节的细胞死亡进行了分类 (1)。I 型细胞死亡或凋亡的特征在于胞质收缩、染色质凝集、核碎裂、质膜起泡和死细胞吞噬更新。凋亡可通过涉及细胞外因子的外在途径发生,包括死亡受体的激活,或者通过涉及细胞内扰动的内在途径发生,包括线粒体外膜通透性 (2)。这两种凋亡途径均导致 caspase 的激活,caspase 是一类半胱氨酸蛋白酶,被合成为含有原结构域的无活性酶原,随后是大的 (p20) 和小的 (p10) 亚基,它们以级联方式被蛋白水解激活。Caspase-3 是一种关键的下游蛋白酶,可通过外在和内在的凋亡途径激活,并裂解与细胞分解有关的大量蛋白质,包括聚(腺苷二磷酸 -核糖)聚合酶 (PARP),即与 DNA 损伤应答有关的蛋白质。

 

II 型细胞死亡或自噬表现为广泛的细胞质空泡化,并像凋亡一样,可能包括吞噬更新。自噬是一种分解代谢过程,可降解包括蛋白质聚集体、受损细胞器和病原体在内的细胞组分 (3)。该过程涉及将这些组分吞噬入双层膜结构,即自噬小体,其与溶酶体融合以降解。自噬需要并可以通过 LC3 家族成员(如 LC3B)从 I 型转化为脂化的 II 型形式的转化来监测,该脂化 II 型形式并入自噬体膜并与多种运货受体结合。SQSTM1/p62 等运货受体将 LC3 与靶向降解的泛素化蛋白结合在一起。在此过程中,SQSTM1/p62也会降解,因此它的表达经常用于监测此过程。

III 型细胞死亡或坏死表现为质膜通透性以及细胞肿胀和碎裂,缺乏明显的吞噬反应,继而导致炎症信号传导,并伴随着损伤相关分子模式 (DAMP) 的释放。坏死可由多种调控途径触发,包括坏死性凋亡和细胞焦亡。坏死性凋亡受 RIP 和 RIP3 激酶活性和 MLKL 的孔形成能力的调节 (4)。坏死性凋亡需要激活 RIP3,然后 RIP3 磷酸化 Ser358(小鼠中的 Ser345)的 MLKL。MLKL 的磷酸化导致与细胞膨胀和 DAMP 的分泌有关的孔复合物的产生。RIP3 激活是通过几个 RIP 同型相互作用基序 (RHIM) 结构域相互作用触发的,包括 RIP、TRIF 和 ZBP1,并导致 RIP3 在 Ser227(小鼠中的 Thr231/Ser232)的磷酸化。典型坏死性凋亡信号转导是由 RIP 介导的,它可以被 necrostatin(一种直接抑制 RIP 激酶活性的小分子)抑制。RIP 激活可通过包括 Ser166 在内的自磷酸化位点监测。细胞焦亡通常在先天免疫系统的细胞中被诱导,其特征是对 Gasdermin D 的裂解 (5)。在被炎性 caspase (Caspase-1, -4, -5) 剪切后产生的 Gastermin D 的氨基末端片段低聚形成孔。Gasdermin D 的典型剪切通过两步过程进行。第一步涉及靶标如 NLRP3 以及 IL-1β 和 IL-18 前体的转录调控。在第二个执行步骤中,通过形成炎性体复合物激活 Caspase-1。活化的 Caspase-1 将 Gasdermin D 以及 IL-1β 和 IL-18 裂解为它们的成熟形式,并且这些活性细胞因子通过 Gasdermin D 形成的孔分泌。

  1. Galluzzi, L. et al. (2018) Cell Death Differ 25, 486-541.
  2. Green, D.R. (1998) Cell 94, 695-8.
  3. Codogno, P. and Meijer, A.J. (2005) Cell Death Differ. 12 Suppl 2, 1509-18.
  4. Shan, B. et al. (2018) Genes Dev 32, 327-40.
  5. Shi, J. et al. (2017) Trends Biochem Sci 42, 245-54.

通路和蛋白

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