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19171
Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit
一抗

Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit #19171

引用 (0)

使用 ASC/TMS1 (D2W8U) 兔单克隆抗体 (特定小鼠)(实线)或浓度匹配的 兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900(虚线)对 Raw264.7 细胞(蓝色)和 J774A.1 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 对 NIH/3T3 细胞(红色)和 32D 细胞(蓝色)进行流式细胞分析。

使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒(磁珠法) #9005 对经人源干扰素-α (IFN-α) #9906 (10nM) 处理 30 分钟的 U266 细胞的交联染色质和 Stat2 (D9J7L) 兔单克隆抗体进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在 Stat2 的已知靶基因 USP18 内结合(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。如需了解其他 ChIP-seq 情况,请下载产品说明书。

使用 Phospho-Stat2 (Tyr690) (D3P2P) Rabbit mAb 对未经处理(蓝色)或已经 IFN-α(绿色)处理的 U266 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 fragment (Alexa Fluor 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

使用 Akt3 (E1Z3W) Rabbit mAb(绿色)对 A172 细胞(阳性,左)或 LNCaP 细胞(阴性,右)进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight554™13054 Phalloidin #(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

使用非特异性阴性对照抗体(红色)作为对照组,Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对未经处理(绿色)或经 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903处理(蓝色)的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。

对过表达突变型人 APP695 的小鼠 Tg2576 脑细胞进行共聚焦免疫荧光分析。首先用 HS1 (D5A9) XP® 兔单克隆抗体 (特定啮齿类动物)(绿色)和 APP/β-Amyloid (NAB228) 小鼠单克隆抗体 #2450(黄色)标记切片。用小鼠 (G3A1) 单克隆抗体 IgG1 同型对照 #5415 封闭游离二抗结合位点之后,切片用 GFAP (GA5)小鼠单克隆抗体(Alexa Fluor® 647 偶联物)#3657(红色)孵育。胞核用 Hoechst 33342 #4082(蓝色)标记。

使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对经 Human Interferon-α (IFN-α) #9906 (100 ng/ml) 处理 30 分钟的 U266 细胞中提取的交联染色质,在加入Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729​ 后,进行染色质免疫沉淀。使用 human USP18 promoter primers、SimpleChIP® Human WARS Intron 1 Primers #30101 以及 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。每份样品的免疫沉淀 DNA 含量,用染色质投入总量(相当于 1)相对应的信号进行表示。

使用 Phospho-Stat2 (Tyr690) (D3P2P) Rabbit mAb(绿色)和 β-actin (8H10D10) Mouse mAb #3700(红色),对血清饥饿(左图)或经 IFNα 处理(1000 U/ml,30 分钟;右图)的 A-431 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。

使用 Akt3 (E1Z3W) Rabbit mAb(上)和 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691(下)对来自不同细胞系和组织的提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(绿色),对经 LY294002 处理(左)或经胰岛素处理(右)的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5®#4084(DNA 荧光染料)。

使用 ASC/TMS1 (D2W8U) 兔单克隆抗体 (特定小鼠)(绿色)对未经(左上图)或已经 LPS(50 ng/ml,4 小时,中间)处理或已经 LPS 处理后再用 ATP(5 mM,45 分钟,右上图)处理的小鼠原代骨髓源性巨噬细胞 (BMDM) 与 J774A.1(左下图)或 Raw 264.7(右下图)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。注意,经过LPS 和 ATP(白色箭头)刺激后,ASC 会转位至炎症小体。

使用 HS1 (D5A9) XP® 兔单克隆抗体(特定啮齿类动物)(绿色)对 32D 细胞(左图)和 C2C12 细胞(右图)进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (红色)作为对照组,使用 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb(蓝色)对 U266 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor 647 Conjugate) 用作二抗。

使用 Phospho-Stat2 (Tyr690) (D3P2P) Rabbit mAb(上图)和总 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb #72604(下图),对未经处理 (-) 或已经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (10 ng/ml; +) 处理的血清饥饿 U266 和 A-431 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 Akt3 (E1Z3W) Rabbit mAb(上)和 Akt1 (pan) (C67E7) 兔 mAb #4691(下)对重组 Akt1 蛋白、Akt2 蛋白和 Akt3 蛋白进行蛋白质印迹分析。

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(左)或 PTEN (138G6) Rabbit mAb #9559(右),对石蜡包埋的 MDA-MB-468 异种移植物进行免疫组织化学分析。注意:PTEN 缺失型 MDA-MB-468 细胞存在 P-Akt 染色。

对 J774A.1 细胞提取物 ASC/TMS1 进行免疫沉淀。泳道 1 为10% 输入,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 ASC (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific)。使用 ASC/TMS1 (D2W8U) 兔单克隆抗体(特定小鼠)进行蛋白印迹分析。

使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 对石蜡包埋的小鼠脾进行免疫组织化学分析。

使用 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb(绿色),对血清饥饿(左图)或经 IFNα 处理(#1000,30 ng/mL,分钟;右图)的 A-431 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060,对经 SignalStain® Antibody Diluent #8112(左)和 TBST/5% Normal Goat Serum(右)对比处理的石蜡包埋人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

使用 ASC/TMS1 (D2W8U) 兔单克隆抗体(特定小鼠)(上图)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457(下图)对 J774A.1 和 Raw 264.7 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。

使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 对石蜡包埋的 LL2 同基因的肿瘤进行免疫组织化学分析。

对 KARPAS-299 细胞提取物中的 Stat2 进行免疫沉淀。泳道 1 为10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb。使用 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹。KARPAS 细胞系来源:University of Cambridge 的 Abraham Karpas 博士。

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。

使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 对来自 Baf3、32D 和小鼠脾的细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。KARPAS 细胞系来源:University of Cambridge 的 Abraham Karpas 博士。

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对 SignalSlide® Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101(未经处理(左)或经 LY294002 处理(右)的石蜡包埋的 LNCaP 细胞)进行免疫组织化学分析。

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 PTEN 杂合突变小鼠子宫内膜进行免疫组织化学分析。(组织切片由 Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, Boston, MA 的 Sabina Signoretti 博士惠赠)

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 对未经处理(左)或经 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋的 U-87MG 异种移植物进行免疫组织化学分析。

使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb(上)或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691(下),对未经处理或经 LY294002/Wortmannin 处理的 PC-3 细胞、经血清饥饿或 PDGF 处理的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

购买 # 19171T
产品货号 规格 价格 库存
19171T
1 个试剂盒(6 x 20 µl)

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Mouse Specific) 67824 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
M 22 兔 IgG
HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 3892 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
M R 80 兔 IgG
Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb 72604 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
  • ChIP
H M 97, 113 兔 IgG
Phospho-Stat2 (Tyr690) (D3P2P) Rabbit mAb 88410 20 µl
  • WB
  • IF
  • F
H R 97, 113 兔 IgG
Akt3 (E1Z3W) Rabbit mAb 14982 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
H M R 60 兔 IgG
Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb 4060 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
H M R Hm Mk Dm Z B 60 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
山羊 

产品说明

Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit 提供一种经济合算的方法来检测通过蛋白印迹法和/或免疫荧光法检测发现为干扰素相关小胶质细胞活性标记物的蛋白。

特异性/敏感性

Microglia Interferon-Related Module Antibody Sampler Kit 中的每种抗体都能检测其靶蛋白的内源水平。Phospho-Stat2 (Tyr690) (D3P2P) Rabbit mAb 可检测仅在 Tyr690 被磷酸化的 Stat2 蛋白的内源水平。Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP®Rabbit mAb 检测仅在 Ser473 磷酸化后的内源水平的 Akt。HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific) 无法检测人 HS1 蛋白。经计算,HS1 大小为 54 kDa,但是在 SDS-PAGE 凝胶上的表观分子量为 80 kDa。

来源/纯化

使用与小鼠 HS1 中 Leu310、人 Akt3 中 His140、人 Stat2 中 Leu706 周围的残基相对应的合成肽、与人 Stat2 蛋白中 Tyr690 和人 Akt 中 Ser473 周围的残基相对应的磷酸化特异性合成肽以及重组小鼠 ASC/TMS1 蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

使用大量神经系统疾病和衰老模型的 RNA-seq 数据发现了不同的小胶质细胞激活状态。这些激活状态被分为与增殖、神经退化、干扰素关系和 LPS 关系等相对应的模型 (1)。以往使用 RNA-seq 发现特定脑细胞类型的标记物的研究表明,HS1 和 ASC/TMS1 有用且是研究小胶质细胞的专门工具 (2)。HS1 是一种仅在造血源性组织和细胞中表达的蛋白激酶底物 (3),并且 ASC/TMS1 被发现是一种关键的炎症信号转导组分,并在出现促炎信号后结合并激活 caspase-1 (4)。

Stat2 对于 I 型干扰素 IFN-α/β 诱导的转录反应至关重要 (5,6)。在 IFN-α/β 的刺激下,通过结合受体结合的 Jak 激酶,从而磷酸化 Tyr690 位点,进而激活 Stat2 (7)。Akt 是一种在调控存活和凋亡方面起到关键作用的蛋白激酶。各种生长和存活因子均会激活 Akt,以让其在包括 PI3 激酶的 wortmannin 敏感通路中起作用 (8-10),并且其活性经证明对关键 IFN 诱导蛋白的上调必不可少 (11)。通过磷脂结合过程并由 PDK1 在 Thr308 位点磷酸化激活环 (12) ,以及通过羧基末端内部 Ser473 处的磷酸化激活 Akt。曾经功能难以捉摸的 PDK2 可在 Ser473 处磷酸化 Akt ,它被鉴定为在含 rictor 和 Sin1 的雷帕霉素中的非敏感复合体中哺乳动物雷帕霉素靶标 (mTOR) (13,14)。

  1. Friedman, B.A. et al. (2018) Cell Rep 22, 832-47.
  2. Zhang, Y. et al. (2014) J Neurosci 34, 11929-47.
  3. Kitamura, D. et al. (1995) Biochem Biophys Res Commun 208, 1137-46.
  4. Srinivasula, S.M. et al. (2002) J Biol Chem 277, 21119-22.
  5. Kaur, S. et al. (2008) Proc Natl Acad Sci U S A 105, 4808-13.
  6. Fu, X.Y. et al. (1992) Proc Natl Acad Sci U S A 89, 7840-3.
  7. Ihle, J.N. (2001) Curr Opin Cell Biol 13, 211-7.
  8. Franke, T.F. et al. (1997) Cell 88, 435-7.
  9. Burgering, B.M. and Coffer, P.J. (1995) Nature 376, 599-602.
  10. Franke, T.F. et al. (1995) Cell 81, 727-36.
  11. Improta, T. et al. (1994) Proc Natl Acad Sci U S A 91, 4776-80.
  12. Alessi, D.R. et al. (1996) EMBO J 15, 6541-51.
  13. Sarbassov, D.D. et al. (2005) Science 307, 1098-101.
  14. Jacinto, E. et al. (2006) Cell 127, 125-37.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。

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