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52239
Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合

Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit #52239

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使用 Phospho-STING (Ser366) (D7C3S) Rabbit mAb(上图)、STING (D2P2F) Rabbit mAb #13647(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对用 TPA (12-O-Tetradecanoylphorbol-13-Acetate) #4174(80 nM,16 小时)分化,随后不转染(-)或转染 poly(dA:dT)(5 ug/mL,3 小时;+)的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

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在 Leica® BOND™ Rx 上使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人结肠腺癌进行免疫组织化学分析。

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使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb (上图) 、IRF-3 (D83B9) Rabbit mAb #4302 (中图) 、以及β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下图) ,对未经转染 (-) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6小时; +) 转染的野生型 (WT) 小鼠脂肪细胞,以及未经转染 (-) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6 hr; +) 转染的 IRF-3 (-/-) 小鼠脂肪细胞进行蛋白质印迹分析。

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使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) 兔单克隆抗体对未转染(蓝色)或转染 Poly (I:C)(2.5 μg/ml,6 小时;绿色)的 HT-29 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L) ,F (ab') 2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

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使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb,对未经转染 (A) 或经 Poly (I:C) (2.5 µg/ml, 6小时; B) 转染的野生型小鼠脂肪细胞,及未经转染 (C) 或经 Poly (I:C) (2.5 µg/ml, 6小时; D) 转染的 IRF-3 (-/-) 小鼠脂肪细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L) ,F (ab') 2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。

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使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb, #11904(上图)或 β-actin (13E5) Rabbit mAb, #4970(下图)对对照型 HeLa 细胞 (泳道 1) 或 IRF-3 敲除型 HeLa 细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹法分析。IRF-3 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了该抗体对 IRF-3 的特异性。

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使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb(绿色)对未经(左)或经 Poly (I:C)(2.5 μg/ml,6 小时;右)转染的 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

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使用 Phospho-IRAK4 (Thr345/Ser346) (D6D7) Rabbit mAb (上图) 或 IRAK4 Antibody #4363 (下图),对未经处理的 (-) 或经 Human Interleukin-1β (hIL-1β) #8900(50ng/ml,15分钟;+) 处理的血清饥饿 KARPAS-299 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。细胞系来源:University of Cambridge 的 Abraham Karpas 博士。

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使用 IRAK4 Antibody 对 THP-1(人)、RAW 264.7(小鼠)和 H-4-II-E(大鼠)细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

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使用 Phospho-IRF-7 (Ser477) (D7E1W) Rabbit mAb (上图) 、IRF-7 Antibody #4920 (中图) 、或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下图) ,未经处理或经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (10 ng/ml,过夜) 处理再经 poly (I:C) (2.5 μg/ml, 7小时) 按指定要求转染的 HT-29 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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使用 IRF-7 (D2A1J) Rabbit mAb(上)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下)对未处理 (-) 或经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (10 ng/ml, 过夜; +)处理的 HT-29 和 G-361 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb(绿色),对使用 TPA #4174(80 nM, 24 小时)分化,并随后用 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(1 μg/ml,6 小时)处理或不用其处理的 THP-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight554™13054 Phalloidin #(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

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一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

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在 Leica® BOND™ Rx 上使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺神经内分泌癌进行免疫组织化学分析。

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使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb(泳道 3),对 THP-1 细胞提取物的 IRF-3进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。使用 Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 和 Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody #7076 作为二抗。

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对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-),SignalSilence® IRF-7 siRNA I #13139 (+) 或 SignalSilence® IRF-7 siRNA II #13291 (+) 转染的 HT-29 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。转染 24 小时后,使用 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (10 ng/ml, 过夜; +)对细胞进行处理,然后使用 IRF-7 (D2A1J) Rabbit mAb #13014(上)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下)对细胞进行蛋白质印迹分析。IRF-7 (D2A1J) Rabbit mAb 确认了 IRF-7 的表达沉默,而 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb 则被用于上样对照。

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对来自 THP-1 细胞提取物的 Cleaved-IL-1β (Asp116) 进行免疫沉淀,且 THP-1 细胞使用 TPA #4147(80 nM,过夜)进行分化,随后用 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(1 μg/ml,6小时)处理。泳道 1 是10 % input,泳道 2 用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 沉淀,并且泳道 3 用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb 沉淀。使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。

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在 Leica® BOND™ Rx上使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人非霍奇金氏淋巴瘤进行的免疫组织化学分析。

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使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb (绿色) 及 EpCAM (VU1D9) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #5488 (红色) ,对未经转染 (左图) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6小时; 右图) 转染的 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

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使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

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使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb,对重组 Human Interleukin-1β (hIL-1β) # 8900 进行蛋白质印迹分析。

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使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb,对石蜡包埋的 HT-29(左图,阳性)和 A549(右图,阴性)细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。

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使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb (上图) 或 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb #11904 (下图) ,未经转染 (-) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6小时; +) 转染的 HT-29 细胞进行蛋白质印迹分析。

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使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb,对收集自 THP-1 细胞的细胞或培养基的提取物进行蛋白质印迹分析,并且这些 THP-1 细胞使用 TPA #4147(80 nM,过夜)进行分化,随后使用 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(1 μg/ml,6 小时)处理 (-) 或不用其进行处理 (+)。

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使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人结肠癌组织进行免疫组织化学分析。

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使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠肺细胞进行免疫组织化学分析。

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使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人卵巢浆液性乳头状癌组织进行免疫组织化学分析。

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使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人前列腺癌组织进行免疫组织化学分析。

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使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人扁桃体组织进行免疫组织化学分析。

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使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (泳道 2) 或 STING (D2P2F) Rabbit mAb (泳道 3),对 HL-60 细胞提取物STING进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。

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使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

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使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb,对转染空载 (-) 或转染人 STING 蛋白 (hSTING; +) 或小鼠 STING 蛋白 (mSTING; +) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

购买 # 52239T
产品货号 规格 价格 库存
52239T
1 个试剂盒(9 x 20 µl)

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
Phospho-STING (Ser366) (D7C3S) Rabbit mAb 19781 20 µl
  • WB
H 40 兔 IgG
STING (D2P2F) Rabbit mAb 13647 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
H M 33, 35 兔 IgG
Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb 29047 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
H M R 45-55 兔 IgG
IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb 11904 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
H Mk 50-55 兔 IgG
Phospho-IRAK4 (Thr345/Ser346) (D6D7) Rabbit mAb 11927 20 µl
  • WB
  • IP
H 55 兔 IgG
IRAK4 Antibody 4363 20 µl
  • WB
  • IP
H M R Mk 55 兔 
Phospho-IRF-7 (Ser477) (D7E1W) Rabbit mAb 12390 20 µl
  • WB
H 65 兔 IgG
IRF-7 (D2A1J) Rabbit mAb 13014 20 µl
  • WB
H 65 兔 IgG
Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb 83186 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
H 17 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
山羊 

产品说明

Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit 提供一种经济合算的方式,通过使用磷酸特异性、裂解活化特异性和对照抗体来检测与先天免疫有关的多个信号转导通路的激活。该试剂盒包含的一抗足以进行至少两次蛋白质印迹实验。

特异性/敏感性

Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit 中的每种抗体均可检测其内源水平的靶标蛋白。Phospho-STING (Ser366) (D7C3S) Rabbit mAb 可检测仅在 Ser366 位点被磷酸化的 STING。Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb 仅在 IRF-3 在 Ser396 位点被磷酸化时方可识别 IRF-3。Phospho-IRAK4 (Thr345/Ser346) (D6D7) Rabbit mAb 仅在 IRAK4 在 Thr345 和 Ser346 位点被磷酸化时方可识别 IRAK4,并且仅在 IRAK4 的其中一个位点被磷酸化时,才不会与 IRAK4 发生反应。Phospho-IRF-7 (Ser477) (D7E1W) Rabbit mAb 仅在 IRF-7 在 Ser477 位点被磷酸化时方可识别 IRF-7。Phospho-IRF-7 (Ser477) (D7E1W) Rabbit mAb 可能会与介于 100 和 150 kDa 之间的未知蛋白发生交叉反应。Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb 仅在成熟 IL-1β 在 Asp116 位点被裂解活化时方可识别成熟 IL-1β。

来源/纯化

使用与 STING 中 Pro226、IRAK4 中 Lys41、IRF-7 中 Pro115 和 IL-1β 中 Asp116 周围残基相对应的合成肽或重组人 IRF-3 蛋白,对动物进行免疫接种来产生单克隆和多克隆抗体。使用与 STING 中 Ser366、IRF-3 中 Ser396、IRAK4 中 Thr345/Ser346 或 IRF-7 中 Ser477 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生磷酸特异性抗体。使用蛋白 A 和肽亲和力色谱对多克隆抗体进行纯化。

背景

先天免疫系统通过模式识别受体 (PRR) 检测保守病原体相关分子模式 (PAMP) 和损伤/危险相关分子模式 (DAMP),从而对病原体作出快速响应。PRR 有几个家族。Toll 样受体 (TLR) 是跨膜 PRR,并通过募集接头蛋白(如 MyD88)发送信号,从而募集并磷酸化 IRAK1 和 IRAK4,随后激活 NF-κB 和 MAP 激酶 (1-3)。某些 TLR 还可激活 IRF,使 I 型干扰素反应上调。TLR3 和 TLR4 激活会磷酸化并激活 IRF-3,而 TLR7、TLR8 和 TLR9 则会激活 IRF-7 (2, 3)。STING 是一种多次跨膜内质网蛋白,在 DNA 感应细胞浆 PRR(如 DDX41)的胞内 DNA 下游的刺激下或通过结合由 cGAS 产生的第二信使环-GMP-AMP (cGAMP) 都会激活 STING (4-6)。在被激活后,STING 与 TBK1 一同转位到核周内体,从而磷酸化并激活 IRF-3 和 NF-κB (7, 8)。激活和转位之后,STING 被 ULK1 磷酸化,从而导致 STING 失活和降解 (9)。炎症小体是细胞浆多聚蛋白复合体,该复合体在由 AIM2 或类 nod 受体 (NLR) 家族成员(如 NLRP3)检测的 PAMP 或 DAMP 刺激下组装而成 (10)。炎症小体激活 Caspase-1,进而将 IL-1β 和 IL-18 前体蛋白裂解为成熟形式 (10)。

  1. Janssens, S. and Beyaert, R. (2003) Mol Cell 11, 293-302.
  2. Barton, G.M. and Kagan, J.C. (2009) Nat Rev Immunol 9, 535-42.
  3. Blasius, A.L. and Beutler, B. (2010) Immunity 32, 305-15.
  4. Ishikawa, H. and Barber, G.N. (2008) Nature 455, 674-8.
  5. Zhang, Z. et al. (2011) Nat Immunol 12, 959-65.
  6. Sun, L. et al. (2013) Science 339, 786-91.
  7. Zhong, B. et al. (2008) Immunity 29, 538-50.
  8. Ishikawa, H. et al. (2009) Nature 461, 788-92.
  9. Konno, H. et al. (2013) Cell 155, 688-98.
  10. Rathinam, V.A. and Fitzgerald, K.A. (2016) Cell 165, 792-800.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
Tween 是 ICI Americas, Inc. 的注册商标。
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