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58970
Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated)
一抗

Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated) #58970

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筛选器:
  1. IHC

在 Leica® BOND™ Rx 上使用 Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated) 对石蜡包埋的人肺内分泌神经癌进行免疫组织化学分析。

在 Leica® BOND™ Rx 上使用 IIba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated)(左图)或Iba1/AIF-1 (E4O4W) XP® Rabbit mAb #17198 (右图)对石蜡包埋的人卵巢透明细胞癌进行免疫组织化学分析。这两种抗体可检测人 Iba1/AIF-1 上的独立、独特表位。使用两种抗体获得的相似染色模式有助于确认染色特异性。

使用 Iba1/AIF-1 (E5N4J) 对石蜡包埋的正常人脑进行免疫组织化学分析。

使用 Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated) 对石蜡包埋的 THP-1 细胞沉淀物(左图,阳性)或 SH-SY5Y 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。

以浓度匹配的 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415(右图)作为对照,Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated)(左图)对石蜡包埋的人结肠腺癌进行免疫组织化学分析。

使用 Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated) 对石蜡包埋的人咽喉粘液表皮样癌进行免疫组织化学分析。

在 Leica® BOND™ Rx 上使用Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated) 对石蜡包埋的人非霍奇金氏淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。

购买 # 58970S
产品货号 规格 价格 库存
58970S
100 µl

支持数据

反应性 H
敏感性 内源性
MW (kDa)
同型 Mouse IgG1, kappa

产品使用信息

应用 稀释度
IHC-Leica® Bond™ 1:100 - 1:400
免疫组织化学(石蜡) 1:100 - 1:400

存储:

保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。保存在 –20°C 下。请不要分装抗体。

实验步骤

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免疫组织化学法 (Leica®BOND™)

:请参阅产品数据表或产品网页,了解合适的抗体稀释度^。

  步骤 试剂 时间/温度
1 脱蜡 BOND™ Dewax Solution、100% 乙醇、BOND™ Wash Solution 预编程的 Leica® BOND™ 
2 抗原修复  BOND™ Epitope Retrieval ER2 Solution 20 分钟,100˚C | 实验步骤:用 ER2 进行 HIER 20 分钟
3 过氧化物封闭液 Polymer Refine Detection Kit Peroxide Block* 5 分钟
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 0:00 分钟
4 蛋白封闭液(可选) #5425 NGS 或 #15019 Animal-Free Blocking Solution   20 分钟 
5 一抗^ 用 #8112 SignalStain® Antibody Diluent 稀释 30 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 2:00 分钟
6 Post Primary Mouse Linker Polymer Refine Detection Kit Post Primary*  10 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  3x 2:00 分钟
7 二次检测 Polymer Refine Detection Kit Polymer*  10 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution/Deionized Water 定制(参见下文)
8a 可视化 Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine*  0:00 分钟 
8b 可视化 Polymer Refine Detection Kit Mixed DAB Refine*  10 分钟 
  洗涤 去离子水 3x 0:00 分钟
9 复染 Polymer Refine Detection Kit Hematoxylin*  5 分钟 
  洗涤 去离子水 0:00 分钟 
  洗涤 BOND™ Wash Solution  0:00 分钟 
  洗涤 去离子水 0:00 分钟 
10 脱水(离线):    
  在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。  
  在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。  
  在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。  
11 用盖玻片和 #14177 SignalStain® Mounting Medium 封片。  
       
  可选订制洗涤: BOND™ Wash Solution 2:00
    BOND™ Wash Solution 分配器类型:打开 0:00
    BOND™ Wash Solution 2:00
    BOND™ Wash Solution 分配器类型:打开 0:00
    BOND™ Wash Solution 0:00
    去离子水 0:00

*BOND™ Polymer Refine Detection Kit(货号:DS9800)中所含的试剂

LEICA® 是 Leica Microsystems IR GmbH 的注册商标。

BOND™ 是 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 的商标。CST 和 Leica Microsystems IR GmbH 或 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 之间没有附属或赞助关系。

发布​于 2018 年 8 月 

修订于 2018 年 9 月

实验步骤编号:1445

免疫组织化学(石蜡)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 二甲苯。
  2. 无水变性乙醇,组织级(100% 和 95%)。
  3. 去离子水 (dH2O)。
  4. 苏木精(可选)。
  5. 洗涤缓冲液
    1. 含 Tween® 20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液:要制备 1L 1X TBST,添加 100 ml 含 Tween® 20 的 10 X Tris 盐缓冲液 (#9997) 至 900 ml dH20 中并混合。
  6. SignalStain® Antibody Diluent (#8112)。
  7. 1X 柠檬酸盐修复液:要制备 250 mL 的 1X 柠檬酸盐修复液,将 25 ml 的 SignalStain® Citrate Unmasking Solution (10X) (#14746) 稀释到 225 mL 的 dH2O 中。
  8. 3% 过氧化氢:要制备 100 ml,添加 10 ml 30% H2O2 至 90 ml dH2O 中。
  9. 封闭液:TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum:要制备 5 ml 1X TBST,添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution:要制备 4 mL of dH2O,添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  10. 检测系统:SignalStain® Boost IHC Detection Reagents (HRP, Mouse #8125)。
  11. 底物:SignalStain® DAB Substrate Kit (#8059)。
  12. 苏木精: Hematoxylin (#14166)。
  13. 封片剂: SignalStain® Mounting Medium (#14177)。

B. 脱蜡/复水

注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤:
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次,每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。

C. 抗原修复

对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。

D. 染色

  1. 用 dH2O 清洗切片三次,每次 5 分钟。
  2. 切片放入 3 % 过氧化氢水溶液中,孵育 10 分钟。
  3. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  4. 用洗涤缓冲液清洗切片持续 5 分钟。
  5. 使用 100–400 µl 封闭液将每张切片在室温下封闭 1 小时。
  6. 去除封闭液,并给每块切片添加 100–400 µl 在 SignalStain® Antibody Diluent (#8112) 中稀释过的一抗。4°C 孵育过夜。
  7. 让 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Mouse #8125) 平衡至室温。
  8. 清除抗体溶液,用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  9. 按需在切片上滴 1–3 滴 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Mouse #8125)。在加湿箱中室温孵育 30 分钟。
  10. 用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  11. 加入 1 滴 (30 µl) SignalStain® DAB Chromogen Concentrate 至 1 ml 的 SignalStain® DAB Diluent 中,使用前充分混合。
  12. 在每张切片上应用 100–400 µl SignalStain® DAB,并密切观察,通常 1–10 分钟即可得到合适的染色强度。
  13. 将切片浸入 dH2O 中。
  14. 如果需要,使用 hematoxylin (#14166) 复染切片。
  15. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  16. 使切片脱水:
    1. 在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。
    2. 在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
    3. 在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
  17. 使用盖玻片和封片剂 (#14177) 封片。

发布​于 2010 年 2 月 

修订于 2016 年 3 月

实验步骤编号:280

特异性/敏感性

Iba1/AIF-1 (E5N4J) Mouse mAb (IHC Formulated) 可识别 Iba1/AIF-1 总蛋白的内源水平。

物种反应性:

基于 100% 序列同源性预测发生反应的物种:

来源/纯化

使用与人 Iba1/AIF-1 蛋白中 Leu32 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

离子钙结合适配器分子 1 (IBA1),也称为同种异体移植炎症因子 1 (AIF-1),是一种进化上保守的细胞浆钙结合蛋白,包含一对 EF-HAND 钙结合基序(1,2)。Iba1/AIF-1最初是从经历慢性移植排斥的人动脉粥样硬化同种异体心脏移植物中的活化巨噬细胞以及大鼠单核细胞(3,4)克隆的。它的功能还不是很清楚,但是 Iba1/AIF-1 的表达由于干扰素-γ 的表达而上调,因此可以调节巨噬细胞依赖性免疫应答(3)。作为 F-肌动蛋白结合蛋白,Iba1/AIF-1 可能起着重塑肌动蛋白细胞骨架的作用,并促进与各种小胶质细胞/巨噬细胞状态相关的形态变化(5)。Iba1/AIF-1 在单核细胞系细胞中也表达独特,因此被广泛用作大脑和其他组织中的小胶质细胞/巨噬细胞的标记物(6)。

  1. Schulze, J.O. et al. (2008) FEBS J 275, 4627-40.
  2. Deininger, M.H. et al. (2002) FEBS Lett 514, 115-21.
  3. Utans, U. et al. (1995) J Clin Invest 95, 2954-62.
  4. Imai, Y. et al. (1996) Biochem Biophys Res Commun 224, 855-62.
  5. Kanazawa, H. et al. (2002) J Biol Chem 277, 20026-32.
  6. Imai, Y. et al. (1996) Biochem Biophys Res Commun 224, 855-62.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
SignalStain 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
BOND 是 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 的商标。CST 和 Leica Microsystems IR GmbH 或 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 之间没有隐含的附属或赞助关系。
LEICA 是 Leica Microsystems IR GmbH 的注册商标。

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