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19389
APP (E3F3P) Rabbit mAb
一抗

APP (E3F3P) Rabbit mAb #19389

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筛选器:
  1. IHC

使用 APP (E3F3P) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。

使用 APP (E3F3P) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人子宫内膜样腺癌细胞进行免疫组织化学分析。

使用 APP (E3F3P) Rabbit mAb 对石蜡包埋的正常人脑进行免疫组织化学分析。

以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(右图)作为对照,使用 APP (E3F3P) Rabbit mAb(左图)对石蜡包埋的人卵巢浆液性癌细胞进行免疫组织化学分析。

使用 APP (E3F3P) Rabbit mAb 对已经过 shRNA 处理的对照品(左图)或已经过 shRNA 处理的 APP(右图)处理的石蜡包埋的 A549 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。

使用 APP (E3F3P) Rabbit mAb(上图)或 APP (E8B3O) XP® Rabbit mAb #29765(下图) 对石蜡包埋的人脾细胞(左图)或气管腺样囊性癌细胞(右图)进行免疫组织化学分析。这两种抗体可检测人 APP上的独立、独特表位。使用两种抗体获得的相似染色模式有助于确认染色特异性。

购买 # 19389S
产品货号 规格 价格 库存
19389S
100 µl

支持数据

反应性 H
敏感性 内源性
MW (kDa) 9、100-140
同型 兔 IgG

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
免疫组织化学(石蜡) 1:50 - 1:200

存储:

保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。不要分装抗体。‭

实验步骤

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免疫组织化学(石蜡)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 二甲苯。
  2. 无水变性乙醇,组织级(100% 和 95%)。
  3. 去离子水 (dH2O)。
  4. 苏木精(可选)。
  5. 洗涤缓冲液
    1. 含 Tween® 20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液:要制备 1L 1X TBST,添加 100 ml 含 Tween® 20 的 10 X Tris 盐缓冲液 (#9997) 至 900 ml dH20 中并混合。
  6. SignalStain® Antibody Diluent (#8112).
  7. 1X 柠檬酸盐修复液:要制备 250 mL 的 1X 柠檬酸盐修复液,将 25 ml 的 SignalStain® Citrate Unmasking Solution (10X) (#14746) 稀释到 225 mL 的 dH2O 中。
  8. 3% 过氧化氢:要制备 100 ml,添加 10 ml 30% H2O2 至 90 ml dH2O 中。
  9. 封闭液:TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum:要制备 5 ml 1X TBST,添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution:要制备 4 mL of dH2O,添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  10. 检测系统:SignalStain® Boost IHC Detection Reagents (HRP, Rabbit #8114)。
  11. 底物:SignalStain® DAB Substrate Kit (#8059)。
  12. 苏木精: Hematoxylin (#14166)。
  13. 封片剂: SignalStain® Mounting Medium (#14177)。

B. 脱蜡/复水

注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤:
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次,每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。

C. 抗原修复

对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。

D. 染色

  1. 用 dH2O 清洗切片三次,每次 5 分钟。
  2. 切片放入 3 % 过氧化氢水溶液中,孵育 10 分钟。
  3. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  4. 用洗涤缓冲液清洗切片持续 5 分钟。
  5. 使用 100–400 µl 封闭液将每张切片在室温下封闭 1 小时。
  6. 去除封闭液,并给每块切片添加 100–400 µl 在 SignalStain® Antibody Diluent (#8112) 中稀释过的一抗。4°C 孵育过夜。
  7. 使 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Rabbit #8114) 平衡至室温。
  8. 清除抗体溶液,用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  9. 根据需要在切片上滴 1–3 滴 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Rabbit #8114)。在加湿箱中室温孵育 30 分钟。
  10. 用洗涤缓冲液清洗切片 3 次,每次 5 分钟。
  11. 加入 1 滴 (30 µl) SignalStain® DAB Chromogen Concentrate 至 1 ml 的 SignalStain® DAB Diluent 中,使用前充分混合。
  12. 在每张切片上应用 100–400 µl SignalStain® DAB,并密切观察,通常 1–10 分钟即可得到合适的染色强度。
  13. 将切片浸入 dH2O 中。
  14. 如果需要,使用 hematoxylin (#14166) 复染切片。
  15. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。
  16. 使切片脱水:
    1. 在 95% 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 秒。
    2. 在 100% 乙醇中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
    3. 在二甲苯中重复孵育 2 次,每次 10 秒。
  17. 使用盖玻片和封片剂 (#14177) 封片。

发布​于 2010 年 2 月 

修订于 2016 年 3 月

实验步骤编号:283

特异性/敏感性

APP (E3F3P) Rabbit mAb 可识别 APP 总蛋白的内源水平。

物种反应性:

来源/纯化

使用与人 APP 蛋白的羧基末端附近的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

β 淀粉样蛋白 (Aβ) 前体蛋白 (APP) 是一种 100-140 kDa 跨膜糖蛋白,拥有多个同工型 (1)。APP 的氨基酸序列中所包含的淀粉样蛋白结构域能够通过两步蛋白剪切反应得到释放 (1)。释出的 A-β 片段在细胞外沉积积累,形成阿尔茨海默病中淀粉样斑块中主要的组分 (1)。APP 可在多个位点被磷酸化,这会影响蛋白本身的裂解加工和分泌过程 (2-5)。周期素依赖性激酶在 Thr668(APP695 同工型对应的位点)的磷酸化依赖于细胞周期,并在 G2/M 期达到峰值 (4)。在 Thr668 位点被磷酸化的 APP 存在于成年大鼠大脑中,且与培养的神经细胞的分化有关 (5,6)。

  1. Selkoe, D.J. (1996) J Biol Chem 271, 18295-8.
  2. Caporaso, G.L. et al. (1992) Proc Natl Acad Sci USA 89, 3055-9.
  3. Hung, A.Y. and Selkoe, D.J. (1994) EMBO J 13, 534-42.
  4. Suzuki, T. et al. (1994) EMBO J 13, 1114-22.
  5. Ando, K. et al. (1999) J Neurosci 19, 4421-7.
  6. Iijima, K. et al. (2000) J Neurochem 75, 1085-91.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
SignalStain 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。

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