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35277
AMPK Substrate Antibody Sampler Kit

AMPK Substrate Antibody Sampler Kit #35277

免疫印迹法图像 1

使用 Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb(上图)或 AMPKα (D63G4) Rabbit mAb #5832(下图),对未经 (-) 或已经苯乙双胍(5 mM,1 小时;+)处理的血清饥饿 NCI-H2228 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 2

使用 AMPKα (D5A2) Rabbit mAb 对 HeLa、K-562、C6 和 Neuro-2a 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 3

使用 Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb 对未处理的或经 oligomycin #9996(0.5 μM,持续30 分钟)处理的 MCF7 细胞提取物,以及未处理的或经过氧化氢(10 mM,持续5分钟)处理的 C2C12 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 4

使用 ULK1 (D8H5) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 5

使用 Phospho-Raptor (Ser792) Antibody(左上和下)或 Raptor Antibody #2280(右上和下)对未经处理或经 AICAR(0.5 mM,30 分钟)或 oligomycin(0.5 μM,30 分钟)处理的 C2C12 或 293 细胞进行蛋白质印迹分析。

200 kDa 的交叉反应条带*。

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免疫印迹法图像 6

使用 Raptor (24C12) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 7

使用 Beclin-1 (D40C5) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫印迹法图像 8

使用 Phospho-Beclin-1 (Ser93) (D9A5G) Rabbit mAb (上图) 和 Beclin-1 (D40C5) Rabbit mAb #3495(下图),对未经处理 (-) 或已经羰基氰化物 -3- 氯苯腙 (CCCP,100μM,2小时; +) 处理的 MCF7 和 KARPAS-299 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。细胞系来源:University of Cambridge 的 Abraham Karpas 博士。

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免疫印迹法图像 9

一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。

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免疫组织化学(石蜡)图像 10

使用 Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb 对未经(左图)或已经苯乙双胍(右图)处理的石蜡包埋的 NCI-H2228 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。

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免疫印迹法图像 11

使用 Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb(左图)对未处理的或经 oligomycin #9996(0.5 µM,持续30 分钟)处理的 MCF7 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。使用磷酸化(中间图)或在 ULK1 的 Ser555 周围区域的非磷酸化肽(右图)来预孵育抗体,从而证实磷酸化的特异性。

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免疫印迹法图像 12

使用 ULK1 (D8H5) Rabbit mAb(上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对野生型 MEF 和 ULK1 (-/-) MEF 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。MEF 细胞由 Reuben Shaw 博士 (Salk Institute, La Jolla, CA) 惠赠。

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免疫印迹法图像 13

使用 Phospho-Raptor (Ser792) Antibody(上)或 Raptor Antibody #4978(下)对未经处理或经 AICAR(2 mM,1 小时)处理的野生型 (WT) 以及 AMPKα1 和 α2 敲除 (KO) 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 进行蛋白质印迹分析。(图像由 Salk 生物研究所的 Reuben Shaw 博士提供)。

60、70 和 240 kDa 的交叉反应条带*。

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免疫印迹法图像 14

使用 Beclin-1 (D40C5) XP® Rabbit mAb #3495(上)或 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125(下)对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-)、SignalSilence® Beclin-1 siRNA I #6222 (+) 或 SignalSilence® Beclin-1 siRNA II (+) 转染的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Beclin-1 (D40C5) XP® Rabbit mAb 可确认 Beclin-1 的表达沉默,而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 则用作观察上样量和 Beclin-1 siRNA 的特异性。

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免疫印迹法图像 15

使用 Phospho-Beclin-1 (Ser93) (D9A5G) Rabbit mAb (上图) 和 Beclin-1 (D40C5) Rabbit mAb #3495(下图),对未经处理 (-) 或经羰基氰化物-3-氯苯腙 (CCCP,100 μM,2小时; +) 处理及转染空载 (-) 或转染表达全长人 Beclin-1 (hBeclin-1; +) 的表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫组织化学(石蜡)图像 16

使用 Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb 对对照品(左图)或经 λ 磷酸酶处理(右图)的石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。

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免疫印迹法图像 17

使用 Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb(上图)或 ULK1 (D8H5) Rabbit mAb #8054(下图)对未处理的 (-) 或经羰基氰化物3-氯苯腙(CCCP)(100 μM,持续2 小时; +)处理的 MCF7 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。

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免疫沉淀图片 18

使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP®Isotype Control #3900(泳道2) 或 Phospho-Beclin-1 (Ser93) (D9A5G) Rabbit mAb (泳道3),对经羰基氰化物 3- 氯苯基二腙 (CCCP) 处理的 KARPAS-299 细胞 (100μM,2小时) 中的 phospho-Beclin-1 (Ser93) 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Phospho-Beclin-1 (Ser93) (D9A5G) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。使用 Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb#3678作为二抗,避免与 IgG 重链交叉反应。细胞系来源:University of Cambridge 的 Abraham Karpas 博士。

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免疫组织化学(石蜡)图像 19

使用 Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢癌细胞进行免疫组织化学分析。

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免疫组织化学(石蜡)图像 20

在有对照肽(左图)或抗原特异性肽(右图)的情况下,使用 Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。

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产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb 50081 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
H M R 62 兔 IgG
AMPKα (D5A2) Rabbit mAb 5831 20 µl
  • WB
  • IP
H M R Mk B 62 兔 
Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb 5869 20 µl
  • WB
  • IP
H M 140-150 兔 IgG
ULK1 (D8H5) Rabbit mAb 8054 20 µl
  • WB
  • IP
H M R Mk 150 兔 IgG
Phospho-Raptor (Ser792) Antibody 2083 20 µl
  • WB
H M R 150 兔 
Raptor (24C12) Rabbit mAb 2280 20 µl
  • WB
  • IP
H M R Mk 150 兔 IgG
Beclin-1 (D40C5) Rabbit mAb 3495 20 µl
  • WB
  • IP
H M R Mk 60 兔 IgG
Phospho-Beclin-1 (Ser93) (D9A5G) Rabbit mAb 14717 20 µl
  • WB
  • IP
H 60 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
山羊 

AMPK Substrate Antibody Sampler Kit 提供一种性价比高的方法来检测 AMPK 的总磷酸化底物。该试剂盒包含足够抗体,每种一抗可用于两次蛋白质印迹实验。

AMPK Substrate Antibody Sampler Kit 中的每种抗体可检测其靶蛋白的内源水平。Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb 和

AMPKα (D5A2) Rabbit mAb 可检测催化亚基的 α1 和 α2 同工型。仅当小鼠 ULK1 的 Ser555(相当于人 ULK1 的 Ser556 )发生磷酸化时,Phospho-ULK1 (Ser555) (D1H4) Rabbit mAb 才能检测 ULK1 的内源水平。在 90 和 100 kDa 之间检测到未知来源的条带。Phospho-Raptor (Ser792) Antibody 可检测各种分子量的非特异性信号。Phospho-Beclin-1 (Ser93) (D9A5G) Rabbit mAb 可检测 Ser93 和 Ser96 双重磷酸化,但在较大程度上能检测 Ser93 单磷酸化。该抗体也可微弱检测分子量大小约为 70 kDa 的未知条带。

使用合成肽以及与人 AMPKα 蛋白的 Ser172、人 AMPKα 蛋白的 Arg21、小鼠 ULK1 蛋白的 Ser555(相当于人 ULK1 的 Ser556)、人 ULK1 的 Arg600、人 Raptor 的 Glu11、人 Beclin-1 的 Ser93(小鼠中的 Ser91)和人 Beclin-1 的 Thr72 周围的残基相对应的磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。使用与人 raptor 中 Ser792 周围序列相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。抗体经肽亲和层析进行纯化。

AMP 激活的蛋白激酶 (AMPK) 从酵母到植物和动物中都高度保守,且在调节能量平衡方面发挥关键作用 (1)。AMPK 蛋白以一种异三聚体复合体的形式存在,由一个 α-催化亚基、一个 β-调节亚基和一个 γ-调节亚基组成,每个亚基被两到三个不同基因编码 (α1、2;β1、2;γ1、2、3) (2)。该激酶会被因细胞和环境压力引起AMP/ ATP 比值升高而激活,如热休克,缺氧和缺血 (1)。抑癌基因 LKB1 与辅助蛋白 STRAD 和 MO25 一同将位于活化环里 Thr172 位点的 AMPKα 磷酸化,该位点的磷酸化是 AMPK 激酶活性所必需的 (3-5)。

AMPK 会磷酸化许多调控细胞进程(如代谢、细胞生长和自噬)的靶标 (6)。它会抑制哺乳动物 rapamycin 靶标 (mTOR) 的活性,mTOR 在促进细胞生长方面发挥关键作用。mTOR (Raptor) 的调节相关蛋白被确认为可介导 mTOR 信号转导至下游靶标的 mTOR 结合配偶体 (7,8)。Raptor 通过其 TOR 信号转导 (TOS) 基序与 mTOR 底物(包括 4E-BP1 和 p70 S6 激酶)结合,并且是 mTOR 介导这些底物磷酸化所需的 (9,10)。AMPK 直接磷酸化 Raptor Ser722/Ser792,这种磷酸化是抑制含 raptor 的 mTOR 复合体 1 (mTORC1) 所必需的,并在细胞经受能量应激时诱导细胞周期停滞 (11)。AMPK 还通过直接磷酸化 ULK1 来促进自噬 (11,12)。ULK1 是自噬体起始和形成所必需的一种丝氨酸/苏氨酸激酶。在营养不足情况下被激活的 AMPK 可直接磷酸化多个位点的 ULK1,包括 Ser317、Ser555 和 Ser777 (11,12)。相反,作为细胞生长的调节分子和自噬的抑制蛋白, mTOR 可磷酸化 ULK1 Ser757,并破坏 ULK1 和 AMPK 之间的相互作用 (11)。AMPK 还直接磷酸化 Beclin-1,Beclin-1 是自噬体形成期间 ULK1 下游复合体的组分,能够激活 III 类磷脂酰肌醇-3 激酶 VPS34。AMPK 会磷酸化人 Beclin-1 Ser93 和 Ser96 残基,这些残基对应于小鼠 Ser91 和 Ser94 (14)。

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Entrez-Gene Id
556255638678575218408
Swiss-Prot Acc.
Q13131 , P54646 , Q14457 , Q8N122 , O75385
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
第 7,429,487 号美国专利,外国对应物,以及由此而来的儿童专利。

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