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5-Formylcytosine (5-fC) (D5D4K) Rabbit mAb
一抗

5-Formylcytosine (5-fC) (D5D4K) Rabbit mAb #74178

IF-IC

使用 5-Formylcytosine (5-fC) (D5D4K) Rabbit mAb(绿色)和 DYKDDDDK Tag (9A3) Mouse mAb #8146 (红色),对使用构建体转染的 293T 细胞进行共聚焦免疫荧光分析,这种构建体表达加 DDK 标签的 TET1 催化结构域 (TET1-CD)。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。正如预期所示,表达 TET1-CD 的 293T 细胞(红色)显示 5-甲酰基胞嘧啶水平增加(绿色)。

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点印迹-DNA

通过点印迹法确定 5-Formylcytosine (5-fC) (D5D4K) Rabbit mAb 的特异性。专门使用未修饰的胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶 (5-mC)、5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC)、5-羧基胞嘧啶 (5-caC) 或 5-甲酰基胞嘧啶 (5-fC),通过 PCR 产生一个 387 碱基对 DNA 片段的相同序列。将相应的 DNA 片段印迹到尼龙膜上,UV 交联并用 5-Formylcytosine (5-fC) (D5D4K) Rabbit mAb 探测。上半小图显示仅与含有 5-fC 的 DNA 片段结合的抗体,而下半小图显示用亚甲基蓝染色的膜。

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ELISA-DNA 寡聚物

通过 ELISA 确定 5-Formylcytosine (5-fC) (D5D4K) Rabbit mAb 的特异性。使用含有未修饰的胞嘧啶或差异性修饰的胞嘧啶(5-mC、5-hmC、5-caC、5-fC)的单链 DNA 寡聚物滴定抗体。如该曲线中所示,该抗体仅与含有 5-fC 的寡聚物结合。

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应用 稀释度
免疫荧光法(免疫细胞化学) 1:200
DNA 点印迹 1:1000
存储:

保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。存储温度为 -20℃。请不要分装抗体。

5-Formylcytosine (5-fC) (D5D4K) Rabbit mAb 可通过 IF 检测过表达 TET1 催化结构域的细胞中的 5-fC,也可通过使用包含 5-fC 的双链 PCR 片段进行斑点印迹实验来检测 5-fC。许多细胞和组织的 5-fC 内源水平极低,并且可能会低于该抗体的检测范围。现已使用 ELISA 和斑点印迹法验证该抗体的特异性,结果表明对 5-fC 有高特异性。

物种反应性:

预期的所有物种

通过采用 5-甲酰基-2'-脱氧胞嘧啶免疫动物,产生单克隆抗体。

DNA 在胞嘧啶残基的甲基化属于可遗传、表观遗传修饰,对正确调节基因表达、基因组印迹和哺乳动物发育至关重要 (1,2)。5-甲基胞嘧啶是通过两种酶 DNMT3a 和 DNMT3b从头确立的阻抑性表观遗传标记物,并且由 DNMT1 维持 (3, 4)。早先认为,5-甲基胞嘧啶在 DNA 复制期间被动耗尽。然而,后续研究已经证实 Ten-Eleven 转运 (TET) 蛋白 TET1、TET2、和 TET3 可以催化甲基化的胞嘧啶氧化成 5-羟甲基胞嘧啶 (5-hmC) (5)。此外,TET 蛋白还可以氧化 5-hmC 形成 5-甲酰基胞嘧啶 (5-fC) 和 5-羧基胞嘧啶 (5-caC),二者均由胸腺嘧啶-DNA 糖基化酶 (TDG) 切除,从而将胞嘧啶氧化与碱基切除修复通路有效联系,并且支持活跃的胞嘧啶去甲基化 (6,7)。

TET 蛋白介导的胞嘧啶羟甲基化最初在小鼠脑和胚胎干细胞中得到证实 (5, 8)。自此已经在许多组织中发现这种修饰作用,而脑中这种水平最高 (9)。尽管 5-fC 和 5-caC 似乎是短期中间体种类,但越来越多的证据显示, 5-hmC 是具有各种独特功能的不同表观遗传标记物 (10,11)。修饰的碱基本身在体内稳定并且与各种效应分子(包括 MeCP2)相互作用 (11,12)。脑发育期间 5-hmC 的总体水平增加,并且 5-hmC 在启动子区和增强子处富集。另外,在 5-hmC 水平和组蛋白 H3K9 水平与 H3K27 三甲基化水平之间存在反相关性,表明 5-hmC 在基因激活中发挥作用 (12)。在多种癌症(包括髓样白血病和黑色素瘤)中,已经报道 5-hmC 的含量较低 (13,14)。

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仅供研究使用。不得用于诊断流程。

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