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9006
ChIP-Grade Protein G Magnetic Beads
ChIP 试剂盒与试剂

ChIP-Grade Protein G Magnetic Beads #9006

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筛选器:
  1. ChIP

使用 HeLa 细胞的消化染色质与 Histone H3 (D2B12) XP® Rabbit mAb (ChIP Formulated) #4620(泳道 2)、Rpb1 CTD (4H8) Mouse mAb #2629(泳道 3)、Di-Methyl Histone H3 (Lys9) Antibody #9753(泳道 4)或 Normal Rabbit IgG #2729(泳道 5)进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human RPL30 Exon 3 Primers #7014、SimpleChIP® Human MyoD1 Exon 1 Primers #4490 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 ,通过标准 PCR 方法对纯化的 DNA 进行分析。在输入样品(泳道 1)和各种蛋白特异性免疫沉淀物中观察到每个引物组存在 PCR 产物,但在使用 Normal Rabbit IgG #2729(泳道 5 中)进行的免疫沉淀中未观察到 PCR 产物。

使用 HeLa 细胞被消化染色质和指定抗体进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human RPL30 Exon 3 Primers #7014、SimpleChIP® Human MyoD1 Exon 1 Primers #4490 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时定量 PCR 对纯化的 DNA 进行分析。将用蛋白特异性免疫沉淀物达到富集的每个 DNA 序列的相对富集度与用非特异性 Normal Rabbit IgG #2729(背景)达到富集的相同 DNA 序列的数量进行比较。

产品使用信息

涡旋试管片刻,以重悬微珠。每次染色质免疫沉淀 (ChIP) 反应添加 30 μl 珠浆。对于微珠洗涤和后续的免疫复合体洗脱,使用我们的 6-Tube Magnetic Separation Rack #7017 可从溶液中分离出微珠。将含有微珠的试管放在 Magnetic Separation Rack 上,等待 1 -2 分钟让溶液变澄清,再小心地去除上清液。将试管从 Magnetic Separation Rack 上取下,添加新溶液并通过轻轻涡旋或摇晃试管来重悬微珠。

存储:

保存在 PBS(pH 为 7.2)中,含0.05% Tween® 20,0.1ug/ml BSA 和 0.05% 叠氮化钠。储存在 4°C。本产品可稳定保存 12 个月。

产品说明

ChIP-Grade Protein G Magnetic Beads 是一种在染色质免疫沉淀 (ChIP) 检测中用于小规模分离免疫复合体的亲和基质。截短型重组蛋白 G 可共价结合无孔顺磁颗粒。蛋白 G 对许多物种(包括人、兔、小鼠、大鼠和绵羊)的 IgG 亚类都具有高亲和力,可用于使用这些抗体进行免疫沉淀检测。微珠保存在含 BSA (1 mg/ml) 的缓冲液中,以便在分离免疫复合体的过程中阻断蛋白和 DNA 的非特异性结合。使用我们的 6-Tube Magnetic Separation Rack #7017 将微珠从溶液中分离出来,以便使微珠浓集在试管侧,而非试管底部。这可避免离心分离步骤,尽量减少样品丢失并提高洗涤效率。这些微珠可用于 ChIP-seq。

背景

染色质免疫沉淀 (ChIP) 测定法是一种用于在细胞天然染色质背景下探测蛋白质-DNA 相互作用的强大的通用技术 (1,2)。这种测定法用于检测与基因组某个特定区域有关的多种蛋白,或相反,用于检测某种特殊蛋白结合的基因组的多个区域 (3-6)。它可用于确定各种蛋白被募集到某个基因启动子上的特定顺序,或用于“测定”整个基因位点上某种特定组蛋白修饰的相对数量 (3,4)。除了组蛋白外,ChIP 测定法还可用于分析转录因子与辅助因子、DNA 复制因子和 DNA 修复蛋白的结合。进行 ChIP 检测时,细胞或组织首先用甲醛固定,甲醛是一种可逆的蛋白-DNA 交联剂,可“维持”细胞中发生的蛋白-DNA 相互作用 (1,2)。细胞进行裂解,染色质采集后使用超声处理或酶消化法进行碎裂。染色质随后使用对某种特殊蛋白或组蛋白修饰具有特异性的抗体进行免疫沉淀。任何与目标蛋白或组蛋白修饰有关的 DNA 序列都会作为交联染色质复合体的一部分进行共沉淀,并且该 DNA 序列的相对数量会在免疫选择过程中达到富集。免疫沉淀后,蛋白质-DNA 交联被逆转,DNA 得以纯化。标准 PCR 或定量实时 PCR 用于测量通过蛋白特异性免疫沉淀达到富集的某种特定 DNA 序列的数量 (1,2)。或者,ChIP 测定法还可与基因组微芯片(芯片上的 ChIP)技术、高通测序或克隆策略联合使用,它们都能对蛋白-DNA 相互作用和组蛋白修饰进行全基因组分析 (5-8)。

  1. Orlando, V. (2000) Trends Biochem Sci 25, 99-104.
  2. Kuo, M.H. and Allis, C.D. (1999) Methods 19, 425-33.
  3. Agalioti, T. et al. (2000) Cell 103, 667-78.
  4. Soutoglou, E. and Talianidis, I. (2002) Science 295, 1901-4.
  5. Mikkelsen, T.S. et al. (2007) Nature 448, 553-60.
  6. Lee, T.I. et al. (2006) Cell 125, 301-13.
  7. Weinmann, A.S. and Farnham, P.J. (2002) Methods 26, 37-47.
  8. Wells, J. and Farnham, P.J. (2002) Methods 26, 48-56.
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。

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9006S
1 ml(30 次免疫沉淀)

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