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9095
XTT Cell Viability Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

XTT Cell Viability Kit #9095

引用 (2)
FUNC Image 1 - XTT Cell Viability Kit

图 1. C2C12 细胞按不同密度接种在 96 孔板上,并孵育过夜。平板中加入 XTT 检测溶液来孵育细胞。在 1.0、2.0、3.0、4.0 和 5.0 小时测量在 450 nm 处的吸光度。

FUNC Image 2 - XTT Cell Viability Kit

图 2. C2C12 细胞按 2x104 个细胞/孔接种在 96 孔板上并孵育过夜。细胞随后用不同浓度的阿霉素处理过夜。如左小图所示,使用 XTT Cell Viability Kit(红色)和 BrdU Cell Proliferation Assay Kit #6813(蓝色)检测细胞毒性。计算每次检测的抑制率,并将其绘于右图中。阿霉素处理会导致细胞 DNA 损伤,从而引起细胞周期停滞。

FUNC Image 3 - XTT Cell Viability Kit

图 3. HeLa 细胞按 1x104 个细胞/孔接种在 96 孔板上并孵育过夜。细胞随后用不同浓度的 staurosporine 处理过夜。如左小图所示,使用 XTT Cell Viability Kit(红色)和 BrdU Cell Proliferation Assay Kit #6813(蓝色)检测细胞毒性。计算每次检测的抑制率,并将其绘于右图中。Staurosporine 是一种非特异性激酶抑制剂,会诱导细胞凋亡。

购买 # 9095S
产品货号 规格 价格 库存
9095S
1 个试剂盒(1000 次检测;96 孔样式)

产品包括 数量(计数) 溶液颜色
XTT Reagent 2 x 25 ml
Electron Coupling Solution 2 x 0.5 ml 黄色

实验步骤

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XTT Cell Viability Kit 实验步骤

A. 试剂制备

  1. 实验前解冻试剂。

注意:试剂保存在 -20°C 下时可能会发生沉淀。使用前,确保试剂澄清。如有必要,加热试剂到 37°C 后再重新配制。

  1. 添加电子偶联溶液到 XTT 试剂中(容积比 1:50)来配制 XTT 检测溶液。例如,每个 96 孔板需要 5 ml XTT 溶液和 0.1 ml 电子偶联溶液。

B. XTT 测定法

  1. 向 96 孔板(每孔含有 100-200 µl 培养基)的每孔添加 50 µl XTT 检测溶液,随后将平板放回恒温器。
  2. 读取 450 nm 处的吸光度。

注意:该测定法的最佳孵育时间取决于实验设置,如细胞类型、细胞数目和处理。添加 XTT 检测溶液后,在不同时间点读取一块平板可确定最佳孵育时间(如图所示)。

图 1. C2C12 细胞按不同密度接种在 96 孔板上,并孵育过夜。

发布​于 2012 年 10 月 

实验步骤编号:46

产品说明

XTT Cell Viability Assay Kit 是一种能检测细胞代谢活性的比色检测试剂盒。在检测期间,黄色四氮唑盐 XTT 在代谢活跃的细胞中被脱氢酶还原成高度着色的甲臜染料。这种转化仅会发生在活细胞中,因此,产生的甲臜量与样品中的活细胞成比例。在此方法中形成的甲䐶染料溶于水,可以用分光光度计在波长为 450 nm 处测其吸光值进行定量。PMS(N-甲基吩嗪硫酸甲酯)等电子偶联剂会显著提高细胞中 XTT 的还原效率。

特异性/敏感性

XTT Cell Viability Kit 可检测细胞中 XTT 被线粒体酶转化生成的甲臜染料。细胞死亡不久后,这些线粒体酶会迅速失活,因此橙色甲臜染料仅在活细胞中出现。这种 XTT Cell Viability Kit 预计可检测多数细胞系。检测中使用的细胞类型和孵育时间均有所不同,但每孔 0.2-2x104 个细胞对多数实验已足够。为了获得最佳结果,建议进行细胞数目滴定(如图 1 所示)。

背景

细胞活力和增殖测定法在药物发现中广泛用于研究生长因子、细胞因子和细胞毒性制剂。在早期药物发现化合物筛选以及后期的药物安全和毒性研究中,高通量筛选需要一种能够分析大量样品的可靠、灵敏和简易测定法。根据活细胞中四氮唑盐被还原成高度着色的甲臜化合物,已经开发出使用四氮唑盐的比色细胞活力测定法,如 MTT、XTT、WST-1 等 (1,2)。与细胞增殖测定法相比,即对活细胞的 DNA 进行放射性胸苷或 BrdU 标记后对掺入的胸苷(通过定量分析样品放射性)或 BrdU(使用抗 BrdU 抗体)进行定量分析,XTT 测定法不需要放射性物质、细胞固定或细胞通透。因此,不像其他细胞分析测定法,XTT 测定法中的细胞可用于进一步分析。

  1. Scudiero, D.A. et al. (1988) Cancer Res 48, 4827-33.
  2. Roehm, N.W. et al. (1991) J Immunol Methods 142, 257-65.
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。

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