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13837
Cell Health Assay Kit
细胞检测试剂盒

Cell Health Assay Kit #13837

本产品已停产

流式细胞术

图 3. 使用 Calcein-AM(0.1 μM,20 分钟)和碘化丙啶(3 μM,20 分钟)对未经处理(绿色)或已经特非那定(50 μM,4 小时;红色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。

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荧光检测

图 4. 对已经特非那定(12.5 μM,4 小时)处理且用 Calcein-AM(1 μM,30 分钟;绿色)和碘化丙啶(3 μM,30 分钟;红色)染色的 HeLa 细胞(4x104 个细胞/孔)进行荧光分析。

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细胞测定法

图 1. HeLa 细胞按 1,500-100,000 个细胞/孔接种在底部透明的黑色 96 孔板上,并孵育过夜。细胞暴露在 Triton™ X-100(0.05%,10 分钟)中,并使用 Cell Health Assay Kit #13837 检测细胞活力/毒性。Calcein-AM(左图)和碘化丙啶(右图)的相对荧光如图所示。

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细胞测定法

图 2. 使用 Cell Health Assay Kit 检测发现,HeLa 细胞(4 x104 个细胞/孔)用浓度递增的特非那定处理(4 小时)会导致细胞活力降低。

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Cell Health Assay Kit 是一种通过检测胞内酯酶活性和质膜完整性来确定细胞活力的荧光检测试剂盒。该试剂盒包含用于给活细胞染色的 Calcein-AM 以及用作死细胞指示的碘化丙啶 (PI)。Calcein-AM 是钙黄绿素的一种乙酰甲基形式,而钙黄绿素又是一种高亲脂性、可渗透细胞膜的染料。胞内酯酶会将非荧光 Calcein-AM 转化为仅保留在活细胞中且能产生强绿色荧光的强荧光钙黄绿素。DNA 结合试剂碘化丙啶可渗透细胞膜,仅会进入死细胞或细胞膜受损的细胞。胞内 PI 结合 DNA 后,荧光强度大约会增强 40 倍。因此,Calcein-AM 转化为钙黄绿素会导致活细胞产生较强的绿色荧光,而碘化丙啶则会使死细胞产生较强的红色荧光。

在建议的试剂浓度和体积下,一个试剂盒可用于 1000 次检测(96 孔板样式)或 200 次流式细胞检测。

Cell Health Assay Kit 可检测多数真核细胞的细胞活力/毒性。这种检测可使用 500-50,000 个细胞/孔的密度。对 96 孔板使用读板机时,建议进行细胞数目滴定。要达到合适的条件,建议为每种细胞系进行 Calcein-AM 和碘化丙啶滴定。

细胞活力和细胞毒性检测广泛用于研究生长因子和细胞因子、抑制蛋白和激活蛋白以及免疫应答信号的作用。许多细胞活力和毒性检测试剂盒(如 XTT、刃天青 和 BrdU 细胞试剂盒)通过检测某种底物代谢转化或掺入到细胞分子的过程来监视活细胞的存在或活力。用于检测死细胞或将死细胞的检测试剂盒通常依赖于凋亡酶(如 caspase-3)的活性或指示细胞死亡的某种酶或分子(如细胞色素 c、LDH)的胞内释放。Cell Health Assay Kit 能通过使用两种荧光探针同时对活细胞和死细胞进行染色。细胞同时用 Calcein-AM 和碘化丙啶处理后,活细胞会产生强绿色荧光,而死细胞则会产生强红色荧光 (1,2)。使用读板机或扫描仪、流式细胞分析仪或荧光显微镜等许多方法可检测这些荧光信号。这种双重测定法专门用于评估真核细胞的活力和毒性 (1,2),但也可用于检测某些细菌或酵母 (3,4)。

  1. Papadopoulos, N.G. et al. (1994) J Immunol Methods 177, 101-11.
  2. Decherchi, P. et al. (1997) J Neurosci Methods 71, 205-13.
  3. Cárdenas, W. et al. (2004) Fish Shellfish Immunol 17, 223-33.
  4. Hiraoka, Y. and Kimbara, K. (2002) Appl Environ Microbiol 68, 2031-5.
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
Triton 是 The Dow Chemical Company(陶氏化学公司)的商标。

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