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5492
BrdU Cell Proliferation Chemiluminescent Assay Kit
细胞检测试剂盒

BrdU Cell Proliferation Chemiluminescent Assay Kit #5492

引用 (1)

图 1. C2C12 细胞按不同密度接种在 96 孔板的无血清培养基中,并孵育过夜。按不同浓度往平板上添加血清,并孵育细胞 24 小时。最后,往平板中加入 10 μM BrdU,并孵育细胞 4 小时。

图 2. 根据 BrdU 细胞增殖化学发光测定试剂盒 #5492 的检测,MCF 10A 细胞经人表皮生长因子 (hEGF) #8916 处理后,细胞增殖增加。MCF 10A 细胞按 1x104 个细胞/孔接种在 96 孔板上并孵育过夜。然后细胞在无血清培养基中饥饿过夜。将 hEGF 加入板中,孵育细胞 24 小时。最后,往平板中加入 10 μM BrdU,并孵育细胞 4 小时。

图 3. Jurkat 细胞按 5x104 个细胞/孔接种在 96 孔板上并孵育过夜。细胞随后用不同浓度的阿霉素处理 2 小时。最后,往平板中加入 10 μM BrdU,并孵育细胞 4 小时。

购买 # 5492S
产品货号 规格 价格 库存
5492S
1 个试剂盒(500 次检测;96 孔样式)

产品包括 数量(计数) 溶液颜色
BrdU 1 x 150 µl
Fixing/denaturing Solution 2 x 25 ml
BrdU Mouse Detection mAb 1 x 500 µl 绿色
Anti-mouse IgG, HRP-Linked Antibody 1 x 500 µl 红色
Detection Antibody Diluent 1 x 50 ml 绿色
HRP Diluent 1 x 50 ml 红色
Luminol/Enhancer Solution 1 x 25 ml
Stable Peroxide Buffer 1 x 25 ml
20X Wash Buffer 1 x 50 ml

实验步骤

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BrdU Cell Proliferation Chemiluminescent Assay Kit 实验步骤

A. 试剂制备

  1. 用纯净水稀释 20X Wash Buffer(每个 BrdU ELISA 试剂盒均包括)来配制 1X Wash Buffer。
  2. 用 Detection Antibody Diluent(绿色)按 1:100 的比例稀释 BrdU Detection Antibody,以配制 1X 检测抗体溶液。
  3. 用 HRP-linked Antibody Diluent(红色)按 1:100 的比例稀释 Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody,以配制 1X HRP 标记二抗溶液。
  4. 用细胞培养基按 1:100 的比例稀释 BrdU,以配制 10X BrdU 溶液。

B. BrdU 掺入

  1. 将细胞放入 96 孔板上,并与相应的检测物质进行孵育。一般的种子细胞数目为 2500–100000 个细胞/孔,具体取决于细胞生长率。一般的孵育时间为 1-72 小时。
  2. 添加配制的 10X BrdU 溶液到平板孔中,以获得 1X 的最终浓度。(例如,平板如需 100 µl 培养基,则每孔添加 10 µl 10X BrdU 溶液。)
  3. 将细胞放入恒温器。一般的孵育时间为 1-24 小时。
  4. 去除培养基。如需悬浮细胞,则以 300 g 的离心力离心分离平板 10 分钟,随后去除培养基。

C. BrdU 检测

  1. 按 100 µl/孔添加 Fixing/Denaturing Solution,并将平板放在室温下 30 分钟。去除溶液。
  2. 按 100 µl/孔添加配制的 1X 检测抗体溶液,并将平板放在室温下 1 小时。去除溶液,平板用 1X Wash Buffer 洗涤 3 次。
  3. 按 100 µl/孔添加配制的 1X HRP 标记二抗溶液,并将平板放在室温下 30 分钟。去除溶液,平板用 1X Wash Buffer 洗涤 3 次。
  4. 通过混合等量的 Luminol/Enhancer Solution and Stable Peroxide Buffer 来配制工作液。
  5. 向每个孔添加 100 µl 工作液。添加底物 1-10 分钟内,使用平板光度计测量在 425 nM 处的相对光单位 (RLU)。在 10 分钟内读数时,可实现最佳信号强度。

发布​于 2012 年 10 月 

实验步骤编号:8

产品说明

BrdU Cell Proliferation Assay Kit 使用 anti-BrdU antibody 可识别细胞增殖期间掺入到细胞 DNA 中的 5-溴-2'-脱氧尿嘧啶 (BrdU)。细胞用含有 BrdU 的标记培养基培养时,该嘧啶类似物会代替胸苷掺入增殖细胞的新合成 DNA 中。去除标记培养基后,对细胞进行固定,并用我们的固定/变性溶液使 DNA 变性。DNA 变性对提高掺入的 BrdU 进入检测抗体的比例非常重要。随后加入 BrdU mouse mAb 来识别掺入的 BrdU。使用 Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody 识别结合的检测抗体。添加化学发光试剂来增强信号。发光程度(按相对光单位 (RLU) 测量)与掺入细胞的 BrdU 的数量成比例,这可直接指示细胞增殖。

特异性/敏感性

BrdU Cell Proliferation Chemiluminescent Assay Kit 可检测细胞增殖期间掺入到细胞 DNA 中的 BrdU。必须使 BrdU 标记的 DNA 变性,以便使用该试剂盒中的 BrdU mouse mAb 进行检测。该 BrdU mouse mAb 不会与内源性 DNA 发生交叉反应。根据检测中所使用的细胞类型和孵育时间,0.2-2x104 个细胞/孔对多数实验计划即可。为了获得最佳结果,建议进行细胞数目滴定(图 1)。

物种反应性:

预期的所有物种

背景

卤化核苷酸如嘧啶类似物溴脱氧尿苷 (BrdU) 对活细胞和组织中新生的DNA进行标记是有用的。BrdU 可代替胸苷掺入复制到 DNA 中,随后使用特异性单克隆抗体对 BrdU 进行免疫检测,以在细胞周期 S 期中对细胞进行标记。在利用溴脱氧尿苷对细胞或组织进行脉冲标记后,BrdU (Bu20a) Mouse mAb 可用于检测掺入单链 DNA 的 BrdU。请查看我们的详细流程以便了解与各种免疫检测应用的标记程序和双链 DNA 变性有关的信息 (1-4)。

  1. Darzynkiewicz, Z. and Juan, G. (2001) Curr Protoc Cytom Chapter 7, Unit 7.7.
  2. Leif, R.C. et al. (2004) Cytometry A 58, 45-52.
  3. Staszkiewicz, J. et al. (2009) Biochem Biophys Res Commun 378, 539-44.
  4. Rothaeusler, K. and Baumgarth, N. (2007) Curr Protoc Cytom Chapter 7, Unit7.31.
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。

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