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9806
RIPA Buffer (10X)
缓冲液与染料

RIPA Buffer (10X) #9806

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产品使用信息

1. 如果继续使用缓冲液,则建议将 10X 缓冲液保存在 4°C 下 1-2 周。如要保存更长时间,则缓冲液应保存在 -20°C 下。如果要进行许多小实验,则建议分装 10X 缓冲液。

2. 在 24-30°C 下解冻 10x 缓冲液,上下颠倒混合。

3. 用 ddH2O 将 10X RIPA Buffer 稀释为 1X 溶液。该产品提供的 10X 材料足以制备 150ml 总细胞提取物。

4. 将 1X 缓冲液放在冰上冷冻,并在使用前立即添加 PMSF。

注意:CST 建议使用前立即添加 1 mM PMSF。

裂解:

如需裂解黏附细胞,我们建议以下步骤:(所有试剂和裂解物必须冷藏)。

1. 按需处理细胞。

2. 平板用 PBS 洗涤,以去除残留的培养基。

3. 每个 10 cm 的培养皿添加 400 µl 1x RIPA 缓冲液。

4. 平板放在冰上孵育 5 分钟。

5. 刮取细胞。

6. 超声短暂处理。

7. 提取物用冷微量离心机以 14,000 x g 的离心力离心分离 10 分钟。

8. 取上清液后使用。

其他注意事项:

1. 对于非黏附细胞,用 1X PBS 洗涤并进行沉淀后,每 107 个细胞添加 400 µl 缓冲液。

2. 1X RIPA Buffer 可用于裂解组织样品,尽管在添加裂解缓冲液后建议进入均化步骤。按照 100 mg 组织对应 1 ml 缓冲液的比例提取组织。组织提取物还需进行超声处理。

3. 其他蛋白酶抑制剂可添加到 1x 裂解缓冲液中。

4. 试剂抵达时,该缓冲液中可能会发生聚沉,因为提供的 10X 配制液中包含高浓度的试剂。有时,即便加热到室温,也会持续聚沉。我们建议将缓冲液加热到 37°C 15 分钟后混合,以消除沉淀。或用 ddH2O 将 10X RIPA 稀释为至少 5X 的溶液,以便获得不含沉淀物的溶液。一旦稀释,可进行分装并保存在 -20°C 下供日后使用。

溶液和试剂:

20 mM Tris-HCl (pH 7.5)、150 mM NaCl、1 mM Na2EDTA、1 mM EGTA、1% NP-40、1% 脱氧胆酸钠、2.5 mM 焦磷酸钠、1 mM β-甘油磷酸、1 mM Na3VO4、1 µg/ml 亮抑酶肽。

注意:CST 建议使用前立即添加 1 mM PMSF。

存储:

保存在 -20°C 下

产品说明

RIPA 缓冲液用于裂解细胞和组织。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。

购买 # 9806S
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9806S
15 ml

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