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7723
Red Loading Buffer Pack
缓冲液与染料

Red Loading Buffer Pack #7723

产品包括 数量
3X Red Loading Buffer 8 ml
30X Reducing Agent (1.25 M DTT) 1 ml

Red Loading Buffer Pack 在蛋白质印迹实验中用于裂解细胞。

1. 添加 1/10 体积的 30X DTT Reducing Agent 到 1 体积的 3X SDS Loading Buffer 中,以配制新鲜的 3X Reducing SDS Loading Buffer。

2. 用 ddH2O 将 3X SDS Loading Buffer 稀释为 1X 溶液。该产品提供的 3X 物质足以配制 24ml 1X 溶液。

3. 从培养物中吸出培养基;用 1X PBS 洗涤细胞;吸出。

4. 加入 1X SDS 上样缓冲液(6 孔板每孔 100 µl 或 10 cm² 平板每平板 500 µl)来裂解细胞。立即从板上刮下细胞并将提取物转移至微量离心管。置于冰上。

5. 超声处理 10-15 秒来剪切 DNA 并降低样品粘度。

6. 将 20 µl 样品加热到 95-100°C,持续 5 分钟;放在冰上冷却。

7. 微量离心分离 2-5 分钟。

8. 上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。

溶液和试剂:

对 8 ml 3X Red Loading Buffer 和 1 ml 30X Reducing Agent 进行定量分析。

3X Red Loading Buffer Pack:187.5 mM Tris-HCl(在 25ºC 下 pH 为 6.8)、6% (w/v) SDS、30% 甘油和 0.03% (w/v) 酚红。(保存在室温下。) 

     

30X Reducing Agent:1.25 M 二硫苏糖醇 (DTT)(保存在 -20ºC 下。)

存储:

保存在室温和 -20°C 下。3X Red Loading Buffer:187.5 mM Tris-HCl(在 25°C 下 pH 为 6.8)、6% (w/v) SDS、30% 甘油和 0.03% (w/v) 酚红。(保存在室温下。)30X Reducing Agent:1.25 M 二硫苏糖醇 (DTT)(保存在 -20°C 下。)

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。

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