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13054
DyLight™ 554 Phalloidin
缓冲液与染料
细胞染料

DyLight™ 554 Phalloidin #13054

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使用 Cox IV (4D11-B3-E8) Mouse mAb #11967(绿色)对 SK-N-AS 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝用 DyLight™ 554 Phalloidin(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

产品使用信息

为制备 200X 储存液,在 1.5 ml 纯甲醇中进行冻干物质重溶。

使用新鲜、不含甲醇 4% 的甲醛中固定细胞 15 分钟,然后使用 PBS 冲洗三次,每次 5 分钟。固定之后,请遵循 Cell Signaling Technology 实验步骤执行免疫荧光法。在孵育一抗和二抗之后,在 PBS 中按 1:200 比例稀释(0.5 µl/次 100 µl/次)DyLight™ 554 Phalloidin,然后添加到细胞中。可在室温条件下孵育 15 分钟,然后使用 PBS 进行润洗。使用 ProLong® Gold Antifade Reagent #9071 将切片用盖玻片盖住,然后使用适宜的激发波长检测标本。

保存

本产品以冻干固体形式提供,因此可在 -20°C 下干燥、避光稳定存储 1 年。应在纯甲醇中重溶 Phalloidin 接合物,以制备原液,请参阅使用说明了解详情。在纯甲醇中进行重溶之后,原液可在 -20°C 温度下干燥、避光稳定存储 1 年。接合物在水溶液中稳定性较差,因此仅在与细胞孵育期间才可在水溶液中。

产品说明

DyLight™ 554 Phalloidin 通过鬼笔环肽与 F-肌动蛋白的结合,能让研究人员荧光标记固定细胞的细胞骨架。由于本产品会产生与鬼笔环肽有关的毒性,因此不可用于活细胞。在重溶原液后,可按照 1:200 稀释比例足够进行 3000 次分析,100 μl /次

DyLight™ 554 荧光属性:激发:551 nm,发射:572 nm。

背景

肌动蛋白是一种普遍存在的真核蛋白,也是细胞骨架的一个主要组分。哺乳动物至少有 6 种已知的同工型。非肌肉 β- 和 γ-actin 又称为细胞质肌动蛋白,主要在非肌肉细胞中表达,以便控制细胞结构和能动性 (1)。肌动蛋白主要以纤维聚合物形式存在,称为 F-actin。在细胞分裂、内吞作用或应激等过程中,为了回应细胞骨架的重排信号,cofilin 会加速 F-actin 分裂和解聚,进而会导致 G-actin 形态的单体球扩增 (2)。Phalloidin 是一种具有毒性的二环钛物质,存在于致命羊肚菌毒鹅膏中,能够以强的亲和力快速与 F-actin 结合 (3)。

  1. Herman, I.M. (1993) Curr. Opin. Cell Biol. 5, 48-55.
  2. Condeelis, J. (2001) Trends Cell Biol. 11, 288-93.
  3. Lengsfeld, A.M. et al. (1974) Proc Natl Acad Sci U S A 71, 2803-7.
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
DRAQ5 是 Biostatus Limited 的注册商标。
DyLight 是 Thermo Fisher Scientific, Inc. 及其子公司的注册商标。
ProLong 是 Life Technologies 公司的注册商标。

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