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12727
Immunofluorescence Application Solutions Kit
缓冲液与染料

Immunofluorescence Application Solutions Kit #12727

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12727S
1 个试剂盒(100 次测试)

未包括的试剂

  1. 非偶联或偶联一抗。
  2. 荧光素偶联的二抗(如适用)。
  3. 甲醇(如必要)。
  4. 使用 DAPI (#8961) 使封片剂(如 ProLong® Gold Antifade Reagent (#9071))不褪色。

注意:首次使用任何一抗或荧光素偶联的二抗时,对抗体进行滴定,以确定哪种稀释度会在最低的背景下为您的样品产生最强的特定信号。

存储:

保存在建议温度下且不使用时,该试剂盒中的所有组分可保持稳定至少 12 个月。甲醛固定剂应在开封后一个月内使用。收到时,#12528 和 #12606 应保存在室温下。#12411 和 #12378 应保存在 4°C 下。

实验步骤

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实验步骤编号:

Immunofluorescence Application Solutions Kit 实验步骤

注意:请参阅抗体数据表来确定抗体是否经验证且获批用于培养的细胞系 (IF-IC) 或冷冻组织切片 (IF-F),并了解有关相应抗体稀释度的信息。

某些一抗可能需要甲醇固定或透性化,这会在数据表上加以说明。该试剂盒不包含甲醇。

A. 溶液和试剂

注意:该试剂盒中的 #12528#12411#12378 缓冲液含有 0.05% 的叠氮化钠作为防腐剂。叠氮化钠可能会对过氧物酶荧光检测造成负面影响。

提供的试剂

  1. 免疫荧光洗涤缓冲液 (10X):(#12528) 使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水稀释为 1X 洗涤缓冲液。保存在 4°C 下,一旦稀释,应在一个月内使用。
  2. 16% 甲醛,无甲醇: (#12606) 用清水稀释为含 4% 甲醛的 1X 洗涤缓冲液。应丢弃剩余的稀释物质。

    注意:扭开螺旋盖后,所有小瓶内容物应立刻用完。为延长产品的保质期,用针和注射器刺穿硅胶盖来抽取小量溶液。避光保存,并在打开后 1 个月内使用。

  3. 免疫荧光封闭缓冲液: (#12411) 含有羊血清,一种混有少量去垢剂的蛋白阻滞剂。按规定使用并保存在 4°C 下。
  4. 免疫荧光抗体稀释缓冲液: (#12378) 按规定使用并保存在 4°C 下。

其他试剂(未提供)

  1. 非偶联或偶联一抗。
  2. 荧光物质偶联的二抗(如适用)。

    注意:首次使用任何一抗或荧光物质偶联的二抗时,滴定抗体,以确定哪种稀释度会在最低的背景下为您的样品提供最强的特定信号。

  3. 甲醇(如必要)。
  4. 防褪色封片剂,如 ProLong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本准备

  1. 培养的细胞系 (IF-IC)

    注:细胞应直接在多孔平板、腔室载玻片或盖玻片上培养、处理、固定和染色。

    1. 吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X 洗涤缓冲液稀释的 4% 甲醛。

      注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用

      重要提示:如在一抗数据表上有说明,则使用冰冷的 100% 甲醇代替甲醛作为固定剂。

    2. 室温下固定细胞 15 分钟。
    3. 吸干固定剂,用 1X 洗涤缓冲液漂洗三次,每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。
  2. 冰冻/低温切片 (IF-F)

    1. 冰冻固定组织进行免疫染色(C 部分)。
    2. 对新鲜未固定的冰冻组织,请立刻按下列步骤固定:
      1. 使用在 1X 洗涤缓冲液中稀释的 4% 甲醛盖住切片。
      2. 室温下固定切片 15 分钟。
      3. 玻片用洗涤缓冲液漂洗三次,每次 5 分钟。
      4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:除非另外注明,否则所有随后的孵育步骤都应在室温、避光湿盒或带盖的培养皿/平板中完成,以防止干燥和荧光物质淬灭。在这个过程中,任何时候都不要让玻片变干。

  1. 甲醇通透步骤(如适用):吸干洗涤缓冲液,并在样本上覆盖一层 3-5 mm 冰冷的 100% 甲醇。在 -20°C 下孵育 10 分钟,随后用 1X 洗涤缓冲液漂洗 5 分钟。

    注意:仅当一抗数据表上有说明时才需要该步骤。

  2. 在室温下,样品用封闭缓冲液封闭 60 分钟。
  3. 封闭时,按数据表所示在抗体稀释缓冲液中通过稀释来制备一抗。
  4. 吸干封闭缓冲液,使用稀释后的一抗。
  5. 4°C 孵育过夜。
  6. 用 1X 洗涤缓冲液漂洗三次,每次 5 分钟。

    注意:如果使用荧光物质偶联的一抗(如 Alexa Fluor® 荧光物质抗体),则跳至 C 部分步骤 9。

  7. 在用抗体稀释缓冲液稀释的荧光物质偶联二抗中,室温下避光孵育样品 1 小时。
  8. 用 1X 洗涤缓冲液漂洗三次,每次 5 分钟。
  9. 使用 ProLong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) 等防褪色试剂对玻片进行封盖。
  10. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​于 2017 年 12 月 

实验步骤编号:1664

产品说明

Immunofluorescence Application Solutions Kit 旨在便利地提供对细胞培养物 (IF-IC) 或冷冻样品 (IF-F) 进行免疫荧光分析所需的主要支持试剂。该试剂盒中的试剂已使用我们的 IF 批准抗体充分验证,并且用该试剂盒的建议实验步骤可顺利进行,以确保精确和可重复的结果。该试剂盒包含的试剂足以进行 100 次检测,每次 100 µl 检测量。

重要提示:请参阅抗体数据表以确定抗体是否经验证和批准用于培养的细胞系 (IF-IC) 或冷冻组织切片 (IF-F),并了解有关相应抗体稀释度的信息。

某些一抗可能需要甲醇固定或通透处理,这会在数据表上加以说明。该试剂盒不包含甲醇。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
Alexa Fluor 是 Life Technologies 公司的注册商标。
ProLong 是 Life Technologies 公司的注册商标。
Triton 是 The Dow Chemical Company(陶氏化学公司)的商标。

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