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43481
FoxP3/Transcription Factor Fixation/Permeabilization Kit
缓冲液与染料
缓冲液试剂盒

FoxP3/Transcription Factor Fixation/Permeabilization Kit #43481

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Flow Cytometry Image 1 - FoxP3/Transcription Factor Fixation/Permeabilization Kit

以浓度匹配的 Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (PE Conjugate) #63630(左图)作为对照,使用 FoxP3 (3G3) Mouse mAb (PE Conjugate) #49402(右图)和共染料 CD4-APC #78292 对经 #43481 FoxP3/Transcription Factor Fixation/Permeabilization kit 固定和通透的小鼠脾细胞进行流式细胞分析。

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实验步骤

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FoxP3/Transcription Factor Fixation/Permeabilization Kit #43481

A. 溶液和试剂

注:某些试剂盒组分可能会出现沉淀。沉淀物的存在并不会影响该试剂的性能。

提供的试剂:

  • FoxP3/Transcription Factor Fixation/Permeabilization Diluent (1X)(#58766)
  • FoxP3/Transcription Factor Fixation/Permeabilization Concentrate (4X) (#44931):使用 FoxP3/Transcription Factor Fixation/Permeabilization Diluent (1X) 将所需量稀释成 1X 工作溶液
  • FoxP3/Transcription Factor Permeabilization Buffer (10X) (#68751):使用反渗透去离子 (RODI) 水或同等级别的水将所需量稀释成 1X 工作溶液。用于所有洗涤步骤及固定后的抗体孵育。

其他试剂(未提供):

B. 固定和通透

注:根据建议的染料产品实验步骤,Ghost Dye(TM) Violet 510 Viability Dye #59863 等可固定的死活细胞鉴定染料应在固定前添加。去除多余染料后继续进行固定。

注:靶向 CD 标记物或其他胞外表位的抗体可在固定前添加。在固定过程中,这类抗体保持结合目的靶标。固定前可进行一个洗涤步骤,但没有必要。

注:理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。

  1. 进行离心使细胞沉淀,并去除上清液。
  2. 在按照上述制备的 1 mL 的 FoxP3/Transcription Factor Fixation/Permeabilization 1X 工作溶液中重悬细胞。混匀以解离沉淀物,并阻止个别细胞出现交联。
  3. 在室温 (20-25°C) 下孵育 30-60 分钟。避光保存。
  4. 用足够的 1X FoxP3/Transcription Factor Permeabilization Buffer 离心分离来洗涤。丢弃上清液。重复操作。

C. 免疫染色

  1. 将所需数量的细胞分装进试管或加样孔中。(通常,每次实验 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 在按建议稀释度用 1X FoxP3/Transcription Factor Permeabilization Buffer 制备的 100 µl 稀释抗体中重悬细胞。请参阅个别抗体数据表或产品网页,了解建议的稀释度,或通过滴定确定。
  3. 在室温 (20-25°C) 下孵育 1 小时。避光保存。
  4. 用足够的 1X FoxP3/Transcription Factor Permeabilization Buffer 离心分离来洗涤。丢弃上清液。重复操作。
  5. 如果使用荧光素偶联的一抗,则在 200-500 µl 1X FoxP3/Transcription Factor Permeabilization Buffer 中重悬细胞,并在流式细胞分析仪上进行分析;对于非偶联一抗,继续进行下一步骤。
  6. 在荧光素偶联的二抗中重悬细胞,二抗按建议的稀释度用 1X FoxP3/Transcription Factor Permeabilization Buffer 稀释。
  7. 在室温 (20-25°C) 下孵育 30 分钟。避光保存。
  8. 用足够的 1X FoxP3/Transcription Factor Permeabilization Buffer 离心分离来洗涤。丢弃上清液。重复操作。
  9. 在 200-500 µl 1X FoxP3/Transcription Factor Permeabilization Buffer 中重悬细胞,并在流式细胞分析仪上进行分析。

修订于 2020 年 6 月

实验步骤编号:1744

产品说明

该试剂盒含有在流式细胞术中用抗体检测 FoxP3 和其他转录因子所需的试剂。最佳配制的固定和通透缓冲液会终止其生物活性,并让抗体接近胞内靶标。使用包含的 FoxP3/Transcription Factor Permeabilization Buffer 进行抗体稀释、孵育和洗涤步骤,无需单独的试剂。

注:某些试剂盒组分可能会出现沉淀。沉淀物的存在并不会影响该试剂的性能。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
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