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94298
Rab7 (D95F2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)
偶联抗体
单克隆抗体

Rab7 (D95F2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #94298

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筛选器:
  1. IF
Immunofluorescence Image 1 - Rab7 (D95F2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)

使用 Rab7 (D95F2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)(红色)对 SK-MEL-28 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DyLight™ 488 Phalloidin #12935(蓝色假色)标记。样品用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(绿色假色)封装。

购买 # 94298S
产品货号 规格 价格 库存
94298S
100 µl (50 次测试)

支持数据

反应性 H M R Mk
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 兔 IgG

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体与 Alexa Fluor® 647 荧光染料接合,并经内部测试,可用于人体细胞的直接免疫荧光分析。该抗体显示的物种交叉反应性预计与非偶联的 Rab7 (D95F2) XP® Rabbit mAb #9367 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(免疫细胞化学) 1:50 - 1:100

保存

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。不要分装抗体,避光保存,切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(免疫细胞化学)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。

    注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。

  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸干固定液,用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭时,按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​于 2006 年 11 月 

修订于 2013 年 11 月

实验步骤编号:182

特异性/敏感性

Rab7 (D95F2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) 可检测 Rab7 总蛋白的内源水平。

物种反应性:

人, 小鼠, 大鼠, 猴

来源/纯化

使用与人 Rab7 蛋白中 Glu188 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

Rab7 和 Rab9 是小 Rab GTP 酶 Ras 超家族的成员 (1)。两种蛋白都位于晚期内体,但能发挥不同的功能。Rab7 结合 RIPL效应蛋白可调控从早期内体到晚期内体再到溶酶体的膜转运过程 (2,3)。Rab7 还有助于调节生长因子受体的内吞转运和降解 (3,4) 以及吞噬体和自噬泡的成熟 (4-6)。Rab9 与其效应蛋白 p40 和 TIP47 相互作用 (7,8),可促进 MPR(甘露糖 6 硫酸受体)相关溶酶体酶在晚期内体和反面高尔基体网之间的转运 (9,10)。

  1. Zerial, M. and McBride, H. (2001) Nat Rev Mol Cell Biol 2, 107-17.
  2. Feng, Y. et al. (1995) J Cell Biol 131, 1435-52.
  3. Méresse, S. et al. (1995) J Cell Sci 108 (Pt 11), 3349-58.
  4. Ceresa, B.P. and Bahr, S.J. (2006) J Biol Chem 281, 1099-106.
  5. Jäger, S. et al. (2004) J Cell Sci 117, 4837-48.
  6. Méresse, S. et al. (1999) EMBO J 18, 4394-403.
  7. Díaz, E. et al. (1997) J Cell Biol 138, 283-90.
  8. Barbero, P. et al. (2002) J Cell Biol 156, 511-8.
  9. Lombardi, D. et al. (1993) EMBO J 12, 677-82.
  10. Riederer, M.A. et al. (1994) J Cell Biol 125, 573-82.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
DyLight 是 Thermo Fisher Scientific, Inc. 及其子公司的注册商标。
ProLong 是 Life Technologies 公司的注册商标。
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