Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
4551S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H M R Mk Sc |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Mouse IgG1 |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠, 猴, 酿酒酵母
斑马鱼
使用与人 p38 MAP 激酶的 Thr180/Tyr182 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。抗体在最合适的条件下接合 Alexa Fluor® 488,其中 F/P 比值为 2-6。
p38 MAP 激酶 (MAPK) 也称为 RK (1) 或 CSBP (2),它是酵母 HOG 激酶的哺乳动物同源基因,参与控制细胞因子和应激引起的细胞反应的信号转导级联 (1-4)。现已发现 p38 MAPK 的四种同工型:p38α、β、γ(也称 Erk6 或 SAPK3)和 δ(也称 SAPK4)。与 SAPK/JNK 通路相似,p38 MAPK 被多种细胞应激激活,包括渗透压休克、炎性细胞因子、脂多糖 (LPS)、紫外线和生长因子 (1-5)。MKK3、MKK6 和 SEK 通过磷酸化 Thr180 和 Tyr182 位点激活 p38 MAPK。激活的 p38 MAPK 已证实可磷酸化和激活 MAPKAP 激酶 2 (3),并磷酸化转录因子 ATF-2 (5)、Max (6) 和 MEF2 (5-8)。SB203580(4-(4 氟苯基)-2-(4-甲基亚磺酰苯基)-5-(4-吡啶基)-咪唑)是一种 p38 MAPK 的选择性抑制因子。该化合物可抑制 p38 MAPK 对 MAPKAPK-2 的激活以及后续的 HSP27 磷酸化 (9)。SB203580 通过结合 ATP 结合区来抑制 p38 MAPK 的催化活性,但不能抑制上游激酶对 p38 MAPK 的磷酸化 (10)。
探索与本品相关的通路。
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