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13464
Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb  (Alexa Fluor® 555 Conjugate)
偶联抗体

Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb  (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #13464

引用 (1)
筛选器:
  1. IF

使用 Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)(红色)对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 Alexa Fluor® 488 phalloidin #8878(绿色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

购买 # 13464S
产品货号 规格 价格 库存
13464S
100 µl (50 次测试)

支持数据

反应性 H M R
敏感性 内源性
MW (kDa)
同型 兔 IgG

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合 Alexa Fluor® 555荧光染料,并可对人体细胞进行免疫荧光分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb  #2914 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(免疫细胞化学) 1:50

存储:

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。不要分装抗体,避光保存,切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(免疫细胞化学)

A. 溶液和试剂

注意:用反渗透去离子 (RODI) 水或等效净化水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 通透缓冲液 (1X PBS/0.2% Triton X-100):
    要配制 25 ml,添加 2.5 ml 10X PBS 到 22.5 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 50 µl Triton X-100。
  4. Image-iT™ FX Signal Enhancer (#11932)
  5. 封闭缓冲液(1X PBS / 5% 正常血清 / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 0.5 ml 与二抗同一物种来源的正常血清(例如 Normal Goat Serum (#5425))和 0.5 mL 20X PBS 至 9.0 mL dH2O 中并充分混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  6. 抗体稀释缓冲液 (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (9998),并混合。
  7. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注: 细胞应在多孔板、室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用
  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸去固定液,用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在通透缓冲液中室温通透处理细胞 5 分钟。
  2. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  3. 滴 3-4 滴 Image-iT™ FX Signal Enhancer (#11932),并在室温下孵育 30 分钟。
  4. 用 1X PBS 清洗三次,每次 5 分钟。
  5. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  6. 封闭标本时,按照说明书中推荐的稀释比例,在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  7. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  8. 4°C 温度下孵育过夜
  9. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  10. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 以及带 DAPI (#8961) 的 Prolong® Gold AntiFade Reagent 盖住切片。
  11. 为达到最佳效果,应立即采用适当的激发波长检测标本。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布于 2011 年 2 月

实验步骤编号:6

特异性/敏感性

仅当极光激酶 A/B/C 蛋白分别在 Thr288、Thr232 或 Thr198 位点被磷酸化时,Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) 才可检测出内源水平的极光激酶 A/B/C 蛋白。

物种反应性:

人, 小鼠, 大鼠

来源/纯化

使用与人极光激酶 B 蛋白中 Thr232 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

Aurora 激酶属于高度保守的有丝分裂丝氨酸/苏氨酸激酶家族,已在哺乳动物细胞中识别出该家族的三个成员,分别为 Aurora A、B 和 C (1,2)。研究表明,时序表达模式和 Aurora 激酶在有丝分裂亚细胞定位与有丝分裂结构有关。Aurora 激酶的功能可作用于 G2 期到胞质分裂,有可能涉及重要的细胞周期事件,如中心体复制、染色体双向定位和隔离、卵裂沟的定位和脱离 (3)。Aurora A 在中心体上被发现,沿着有丝分裂的纺锤体微管以及在有丝分裂增殖细胞的细胞浆中分布。Aurora A 蛋白水平在 G1 期和 S 期很低,在细胞周期 G2/M 期达到最高。Aurora A 在催化域 Thr288 位点的磷酸化会增加激酶活性。Aurora A 可参与中心体分离、成熟和纺锤体装配和稳定性。Aurora B 蛋白也在细胞周期 G2/M 期表达最多;Aurora B 激酶活性在有丝分裂的中期到末期时最高。前期时 Aurora B 在染色体定位到纺锤体之前与之结合。Aurora B 通过控制微管-着丝粒的结合和胞质分裂调控染色体分离。G2/M期 Aurora A 和 Aurora B 的表达与组蛋白 H3 的磷酸化高度一致 (4,5);研究人员已经发现多种人类癌症中这些激酶均呈过表达 (2,4)。在前期到胞质分裂期,Aurora C 都位于中心体上, mRNA 和蛋白水平都在 G2/M 期达到最高。尽管典型的 Aurora C 蛋白的表达局限在睾丸中,但研究发现多种癌细胞系中也有过表达的 Aurora C (6)。

  1. Warner, S.L. et al. (2003) Mol Cancer Ther 2, 589-95.
  2. Katayama, H. et al. (2003) Cancer Metastasis Rev 22, 451-64.
  3. Andrews, P.D. et al. (2003) Curr Opin Cell Biol 15, 672-83.
  4. Pascreau, G. et al. (2003) Prog Cell Cycle Res 5, 369-74.
  5. Crosio, C. et al. (2002) Mol. Cell. Biol. 22 (3), 874-885.
  6. Kimura, M. et al. (1999) J Biol Chem 274, 7334-40.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
Alexa Fluor 是 Life Technologies 公司的注册商标。
DRAQ5 是 Biostatus Limited 的注册商标。
Image-iT 是 Life Technologies Corporation 的注册商标。
本产品中的 Alexa Fluor 染料偶联抗体经 Life Technologies Corporation 许可销售,仅供研究使用,不可与 DNA 微阵列结合使用。Alexa Fluor® 染料(除 Alexa Fluor® 430 染料外)是待审批的授权专利。Alexa Fluor® 是 Molecular Probes, Inc 的注册商标。

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