Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
2015S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H M R Hm Mk |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Mouse IgG1 |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠, 仓鼠 , 猴
兔
使用与人 p53 中 Ser20 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。该抗体在最合适的条件下偶联 Alexa Fluor® 488,其中 F/P 比值为 2-6。
p53 肿瘤抑制蛋白在 DNA 损伤和其他基因组畸变的细胞应答中起重要作用。p53 的激活会导致细胞周期停滞、DNA 修复或凋亡 (1)。p53 在体内多个位点被磷酸化,且由多种不同的蛋白激酶在体外磷酸化 (2,3)。DNA 损伤会诱导 p53 在 Ser15 和 Ser20 位点磷酸化,导致 p53 和负调节分子(肿瘤蛋白 MDM2)之间的相互作用减弱 (4)。MDM2 通过靶标泛素化和蛋白酶体降解,抑制 p53 累积 (5,6)。p53 可在 Ser15 和 Ser37 位点被 ATM、ATR 和 DNA-PK 磷酸化。磷酸化会损坏 MDM2 结合 p53 的能力,促进 p53 在 DNA 损伤时的累积和激活 (4,7)。Chk2 和 Chk1 可在 Ser20 位点磷酸化 p53,增强 p53 四聚体化、稳定性和活性 (8,9)。p53 可在体内 Ser392 位点磷酸化 (10,11),并在体外被 CAK 磷酸化 (11)。p53 在 Ser392 位点的磷酸化在人类肿瘤中增强 (12),并被报道具有影响生长阻遏剂的作用、DNA 结合、p53 的转录激活 (10,13,14)。p53 可在体内和体外 Ser6 和 Ser9 位点,被 CK1δ 和 CK1ε 磷酸化 (13,15)。Ser46 位点的 p53 磷酸化可调节 p53 诱导凋亡的能力 (16)。p300 和 CBP 乙酰转移酶能够介导 p53 的乙酰化。去乙酰化抑制可以阻止 MDM2 募集 p19 (ARF) 介导的 HDAC1 复合体,从而稳定 p53。乙酰化对应激反应中 p53 蛋白的累积发挥积极作用 (17)。DNA 损伤后,人类 p53 在 Lys382 位点(小鼠为 Lys379)发生在体乙酰化,促进 p53-DNA 的结合 (18)。p53 通过与 SIRT1 蛋白相互作用,发生去乙酰化,而 SIRT1 蛋白是参与细胞衰老和 DNA 损伤应激的去乙酰化酶 (19)。
探索与本品相关的通路。
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