Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
67762S | 100 µg |
REACTIVITY | M |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rat IgG2b kappa |
Product Information
For optimal flow cytometry results, we recommend 0.06 μg of antibody per test.
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:300 |
Flow Cytometry (Live) | 1:300 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
注:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。
注:人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白(例如,巨噬细胞/单核细胞谱系)时,在用兔抗体进行免疫染色之前,用人 Fc 块预孵育活细胞。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
发布时间 2017 年 6 月
修订时间 2022 年 1 月
实验步骤编号:1504
小鼠
通过亲和色谱从组织培养上清液纯化这种单克隆抗体。该纯化抗体在最佳条件下与从制备过程中分离出来的未反应染料偶联。
主要组织相容性复合体 II 类(MHC II 类)分子是在巨噬细胞、树突状细胞和 B 细胞等抗原呈递细胞表面表达的异二聚体跨膜糖蛋白。干扰素 γ 信号转导还会诱导在其他细胞类型中的表达 (1)。在显示在细胞膜上之前,MHC II 类分子定位于外源性肽抗原,抗原长约 15-24 个氨基酸,并且来源于溶酶体消化的内吞胞外蛋白 (2)。在对胞外病原体产生免疫应答期间,通过 MHC II 类的抗原呈递是 T 细胞激活所必需的 (2)。在人体中,MHC II 类蛋白复合体被人白细胞抗原基因复合体 (HLA) 编码。与 MHC II 类相对应的 HLA 包括 HLA-DP、HLA-DM、HLA-DOA、HLA-DOB、HLA-DQ 和 HLA-DR (3)。
M5/114.15.2 抗体会与小鼠 MHC II 类、I-A 和 I-E 亚区被编码的糖蛋白(I-Ab、I-Ad、I-Aq、I-Ed、I-Ek,而不是 I-Af、I-Ak 或 I-As) 发生反应。它能检测携带 H-2b、H-2d、H-2q、H-2p、H-2r 和 H-2u 单倍型的小鼠(而不是携带 H-2s 或 H-2f 单倍型的小鼠)中 B 细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突细胞和激活 T 淋巴细胞上存在的多态决定簇 (4-7)。报道称,M5/114 单克隆抗体 会抑制受限于 I-A 且携带 H-2b、H-2d、H-2q、H-2u(而不是 H-2f、H-2k 或 H-2s)单倍型的 T 细胞的反应 (8,9)。
除非如以 CST 合法授权代表签署的书面形式另行明确同意,否则以下条款适用于 CST、其附属公司或其分销商提供的产品。除非 CST 合法授权代表以书面形式单独接受,否则任何附加于或异于此处所载条款和条件的客户条款和条件均被拒绝且无效。
产品用“仅供研究使用”或类似标示声明标示,并且尚未经 FDA 或其他国外或国内监管实体出于任何目的批准、准许或许可。客户不得出于任何诊断或治疗目的或以任何与产品标示声明相冲突的方式使用任何产品。CST 销售或许可的产品提供给作为最终用户的客户,且仅用于研究和开发用途。出于诊断、预防或治疗目的任何产品使用或出于转售(单独或作为成分)或其他商业目的的任何产品购买都要求来自 CST 的单独许可。客户 (a) 不得向任何第三方出售、许可、出借、捐赠或另行转让或提供任何本公司产品,无论单独或联合其他材料方式,或使用本公司产品制造任何商业产品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反编译、反汇编或另行尝试发现本公司产品的底层结构或技术,或出于开发与 CST 产品或服务竞争的任何产品或服务的目的使用本公司产品,(c) 不得从本公司产品改变或移除任何商标、商品名称、徽标、专利或版权声明或标记,(d) 仅应根据 CST 产品销售条款和任何适用文档使用本公司产品,以及 (e) 应就客户联系本公司产品所用的任何第三方产品或服务而言遵守任何许可、服务条款或类似协议。