对促销感兴趣? | 点击此处 >>
58326
Mcl-1 (D2W9E) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
偶联抗体

Mcl-1 (D2W9E) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #58326

引用 (0)
筛选器:
  1. F

以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #2975(红色)作为对照,使用 Mcl-1 (D2W9E) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)(蓝色)对 L-929 细胞进行流式细胞分析。

使用 Mcl-1 (D2W9E) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 对 SK-OV-3 细胞(蓝色)和 MCF7 细胞(绿色)进行流式细胞分析。

使用 Mcl-1 (D2W9E) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 对 SK-OV-3 细胞(蓝色)和 MCF7 细胞(绿色)进行流式细胞分析。

购买 # 58326S
产品货号 规格 价格 库存
58326S
100 µl (50 次测试)

支持数据

反应性 H M R
敏感性 内源性
MW (kDa)
同型 兔 IgG

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合 Alexa Fluor® 488 荧光染料,并可对人体细胞进行直接的流式细胞分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 Mcl-1 (D2W9E) Rabbit mAb #94296 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
流式细胞术 1:50

存储:

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

打印

查看 > 折叠 >

针对直接偶联抗体的甲醇透化实验步骤(流式细胞术)

A. 溶液和试剂

本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 1X 磷酸盐缓冲液 (PBS):要制备 1 L 1X PBS:添加 100 ml 10X PBS (#12528) 到 900 ml 水中混合。
  2. 4% 甲醛,不含甲醇 (#47746)
  3. 100% 甲醇 (#13604):用前冷却
  4. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来制备 0.5 % BSA PBS 缓冲液。储存在 4°C。

注意:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活性染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com/flowdyes,了解经流式细胞术验证的细胞染料列表。

B. 固定

:固定前,应分离黏附细胞或组织,并放在单细胞悬浮液中。

注意:理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。

注意:如果使用全血,则需在固定前裂解红细胞并通过离心洗涤。

注意:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程中,这类抗体保持结合目的靶标。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。

  1. 进行离心使细胞沉淀,并去除上清液。
  2. 按每 100 万个细胞大约 100 µl 4% 甲醛的密度重悬细胞。混匀以解离沉淀物,并阻止个别细胞出现交联。
  3. 在室温 (20-25°C) 下固定 15 分钟。
  4. 用足够的 1X PBS 离心洗涤。将上清液丢弃在合适的废液缸中。在 0.5-1 ml 1 X PBS 中重悬细胞。继续进行通透步骤。
    1. 或者,细胞可放在 1X PBS 中保存在 4°C 下过夜。

C. 通透

  1. 通过温和涡旋混合情况下向预冷的细胞中缓慢添加冰冷的 100% 甲醇至 90​% 甲醇的终浓度,以通透细胞。
  2. 在冰上通透至少 10 分钟。
  3. 继续进行细胞免疫染色(D 部分)或将细胞储存于 -20°C 的 90% 甲醇中。

D. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

  1. 将所需数量的细胞分装进试管或加样孔中。(通常,每次实验 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心分离,用足够的 1X PBS 洗涤以清除甲醇。将上清液丢弃在合适的废液缸中。如有必要,可重复进行。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,稀释的一抗按建议的稀释度或根据滴定确定用抗体稀释缓冲液制备。
  4. 室温孵育 1 小时。避光保存。
  5. 用抗体稀释缓冲液或 1X PBS 进行离心洗涤。丢弃上清液。重复操作。
  6. 在 200-500 µl 1X PBS 中重悬细胞,并在流式细胞分析仪上进行分析。

发布​于 2009 年 7 月 

修订于 2019 年 8 月

实验步骤编号:407

特异性/敏感性

Mcl-1 (D2W9E) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 可识别内源水平的 Mcl-1 总蛋白。

物种反应性:

人, 小鼠, 大鼠

来源/纯化

使用与小鼠 Mcl-1 蛋白 Pro60 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

Mcl-1 是 Bcl-2 家族抗凋亡成员,最初从佛波醇酯诱导分化期间的 ML-1 人髓样白血病细胞系以及单核细胞/巨噬细胞通路分离 (1)。类似于其他 Bcl-2 家族成员,Mcl-1 定位至线粒体 (2),与促凋亡性 Bcl-2 家族成员发生相互作用并对其进行拮抗 (3),并且抑制由多种细胞毒性刺激诱导的凋亡 (4)。Mcl-1 不同于其他家族成员之处是其在转录水平和翻译后水平的调节作用。首先,Mcl-1 具有延长的氨基末端 PEST 区域,该区域是其半衰期相对短的原因 (1,2)。其次,不同于其他家族成员,Mcl-1 通过 PI3K/Akt 依赖性通路快速转录,导致其在髓样分化和细胞因子刺激期间表达增加 (1,5-7)。Mcl-1 在佛波醇酯处理、微管损害剂、氧化应激和细胞因子撤除等刺激下发生磷酸化 (8-11)。在 Thr163(位于 PEST 区域内部保守的 MAP 激酶/ERK 位点)处的磷酸化可减缓 Mcl-1 蛋白质周转 (10),但是可以为在 Ser159 位点由 GSK-3 介导的磷酸化做好准备,后一种磷酸化可导致 Mcl-1 去稳定化 (11)。小鼠中 Mcl-1 缺乏导致围着床期致死性 (12)。此外,通过条件性破坏相应的 mcl-1 基因,显示 Mcl-1 在早期淋巴样发育和成熟淋巴细胞维持中发挥重要作用 (13)。

  1. Kozopas, K.M. et al. (1993) Proc Natl Acad Sci USA 90, 3516-20.
  2. Yang, T. et al. (1995) J Cell Biol 128, 1173-84.
  3. Sato, T. et al. (1994) Proc Natl Acad Sci USA 91, 9238-42.
  4. Zhou, P. et al. (1997) Blood 89, 630-43.
  5. Wang, J.M. et al. (1999) Mol Cell Biol 19, 6195-206.
  6. Jourdan, M. et al. (2003) Oncogene 22, 2950-9.
  7. Chao, J.R. et al. (1998) Mol Cell Biol 18, 4883-98.
  8. Domina, A.M. et al. (2000) J Biol Chem 275, 21688-94.
  9. Inoshita, S. et al. (2002) J Biol Chem 277, 43730-4.
  10. Domina, A.M. et al. (2004) Oncogene 23, 5301-15.
  11. Maurer, U. et al. (2006) Mol Cell 21, 749-60.
  12. Rinkenberger, J.L. et al. (2000) Genes Dev 14, 23-7.
  13. Opferman, J.T. et al. (2003) Nature 426, 671-6.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
Alexa Fluor 是 Life Technologies 公司的注册商标。
本产品中的 Alexa Fluor 染料接合物已获得 Life Technologies Corporation 的许可销售,仅供研究使用,不可与 DNA 微阵列和高内涵筛选 (HCS) 合并使用。

Powered By OneLink