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48641
GM130 (D6B1) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)
偶联抗体
单克隆抗体

GM130 (D6B1) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #48641

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筛选器:
  1. IF
Immunofluorescence Image 1 - GM130 (D6B1) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)

使用 GM130 (D6B1) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) 对 A-172 细胞(左图)和 HeLa 细胞(右图)进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DyLight™ 488 Phalloidin #12935(绿色)标记,然后用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封装。

购买 # 48641S
产品货号 规格 价格 库存
48641S
100 µl (50 次测试)

支持数据

反应性 H Mk
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 兔 IgG

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体与 Alexa Fluor® 555 荧光染料接合,并经内部测试,可用于人体细胞的直接免疫荧光分析。该抗体显示的物种交叉反应性预计与非偶联的 GM130 (D6B1) XP® Rabbit mAb #12480 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(免疫细胞化学) 1:100

保存

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。不要分装抗体,避光保存,切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(免疫细胞化学)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。

    注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。

  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸干固定液,用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭时,按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​于 2006 年 11 月 

修订于 2013 年 11 月

实验步骤编号:182

特异性/敏感性

GM130 (D6B1) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) 可检测 GM130 总蛋白的内源水平。这种抗体可以与 30 kDa 未知来源的蛋白质发生交叉反应。

物种反应性:

人, 猴

来源/纯化

使用与人 GM130 蛋白的 Thr185 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

高尔基体在导引至细胞其他部分(如质膜、溶酶体和内体)的蛋白质及膜的修饰、组织和转运过程中发挥作用。这种受调节的转运对适当的蛋白质定位、分泌和信号转导重要。高尔基体蛋白家族成员,包括 GM130、Giantin、p115 和 GRASP65,因其存在于高尔基体基质中及其长卷曲螺旋结构域而确定。高尔基体蛋白功能,部分地受 Rab 家族和 Arl 家族的小 GTP 酶调节,包括建立及维持高尔基体结构和转运(1 中已论述)。高尔基体池堆叠并水平连接,以形成带状物。GRASP65 和 GM130 是介导高尔基体装配期间带状物形成的膜融合事件必需的。这些水平融合事件引起高尔基体酶均匀分布 (2)。GM130 和 Giantin 与转运因子 p115 相互作用以促进内质网 (ER)-高尔基体转运 (3)。GM130 还涉及 Ether-a-go-go 相关 (hERG) 钾离子通道的转运。不适宜的 hERG 定位可能是长 QT 综合征(一种遗传性和潜在致命的心律失常)中的基础病因 (4)。另外,GM130 借助其相互作用于并激活丝氨酸/苏氨酸激酶 YSK1 和 Mst4,涉及调节侵犯、迁移和细胞极化的信号转导 (5)。

  1. Barr, F.A. and Short, B. (2003) Curr. Opin. Cell Biol. 15, 405-413.
  2. Puthenveedu, M.A. et al. (2006) Nat. Cell Biol. 8, 238-248.
  3. Alvarez, C. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276, 2693-2700.
  4. Roti, E.C. et al. (2002) J. Biol. Chem. 277, 47779-47785.
  5. Preisinger, C. et al. (2004) J. Cell Biol. 164, 1009-1020.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
DyLight 是 Thermo Fisher Scientific, Inc. 及其子公司的注册商标。
ProLong 是 Life Technologies 公司的注册商标。
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