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23198
Calnexin (C5C9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)
偶联抗体
单克隆抗体

Calnexin (C5C9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #23198

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筛选器:
  1. IF
Immunofluorescence Image 1 - Calnexin (C5C9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)

使用 Calnexin (C5C9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)(红色)和 β-Actin (13E5) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #8844(绿色)对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。

购买 # 23198S
产品货号 规格 价格 库存
23198S
100 µl (50 次测试)

支持数据

反应性 H Mk
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 兔 IgG

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体与 Alexa Fluor® 555 荧光染料接合,并经内部测试,可用于人体细胞的直接免疫荧光分析。该抗体显示的物种交叉反应性预计与非偶联的 Calnexin (C5C9) Rabbit mAb #2679 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(免疫细胞化学) 1:100 - 1:400

保存

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。不要分装抗体,避光保存,切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(免疫细胞化学)

A. 溶液和试剂

注意:用反渗透去离子 (RODI) 水或等效净化水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 甲醇,100%
  4. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  5. 抗体稀释缓冲液 (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (9998),并混合。
  6. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用
  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸去固定液,用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 甲醇通透步骤:在细胞上覆盖冰冷的 100% 甲醇(使用足够的甲醇完全覆盖至 3–5 mm,不要让其干燥),并在 –20°C 下用甲醇孵育 10 分钟,同时用 1X PBS 漂洗 5 分钟。
  2. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  3. 封闭时,按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  4. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  5. 4°C 温度下孵育过夜
  6. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  7. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 以及带 DAPI (#8961) 的 Prolong® Gold AntiFade Reagent 盖住切片。
  8. 为达到最佳效果,立即以适当的激发波长检测标本。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​于 2006 年 11 月 

修订于 2010 年 12 月

实验步骤编号:220

特异性/敏感性

Calnexin (C5C9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) 可检测总钙联蛋白的内源水平。

物种反应性:

人, 猴

来源/纯化

使用与人钙联蛋白序列相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

分泌和跨膜蛋白在多核糖体上合成,然后转位到内质网 (ER) 中,在内质网中常常通过二硫键形成、氨基糖基化和折叠进行修饰。为了帮助蛋白质正确折叠,内质网包含一系列分子伴侣,其中包括钙联蛋白。钙联蛋白最初被确定为鼠 I 类组织相容性分子 (1,2)。钙联蛋白是嵌入内质网膜的一种钙结合蛋白,可以将新合成的糖蛋白保留在内质网内,以确保其正确折叠并进行质量控制 (3-5)。通过凝集素位点界定钙联蛋白对糖蛋白的子集特异性,该位点可结合折叠糖蛋白上的一种早期寡糖中间体 (5)。

  1. Degen, E. and Williams, D.B. (1991) J. Cell Biol. 112, 1099-1115.
  2. Ahluwalia, N. et al. (1992) J. Biol. Chem. 267, 10914-10918.
  3. Rajagopalan, S. et al. (1994) Science 263, 387-390.
  4. Bergeron, J.J. et al. (1994) Trends Biochem. Sci. 19, 124-128.
  5. Williams, D.B. (2006) J. Cell Sci. 119, 615-623.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
ProLong 是 Life Technologies 公司的注册商标。
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第 7,429,487 号美国专利,外国对应物,以及由此而来的儿童专利。
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