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50230
BrdU (Bu20a) Mouse mAb (PE Conjugate)
偶联抗体

BrdU (Bu20a) Mouse mAb (PE Conjugate) #50230

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筛选器:
  1. F

以 DRAQ5® 作为对照,使用 BrdU (Bu20a) Mouse mAb (PE conjugate) 对掺入 BrdU(30 分钟)的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析(DNA 含量)。

购买 # 50230S
产品货号 规格 价格 库存
50230S
100 µl (50 次测试)

支持数据

反应性 所有物种
敏感性
MW (kDa)
同型 小鼠 IgG1

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合藻红蛋白 (PE),并可对人体细胞进行了直接的流式细胞术分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 BrdU (Bu20a) Mouse mAb #5292 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
流式细胞术 1:50

存储:

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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流式细胞术

A. 溶液和试剂

  1. 1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS):将 8 g NaCl、0.2 g KCl、1.44 g Na2HPO4 和 0.24 g KH2PO4 溶解在 800 mL 蒸馏水 (dH2O) 中。用 HCl 调整 pH 值至 7.4,使其容量达到 1 升。室温保存。
  2. BrdU(5-溴-2′-脱氧尿苷)EMD biosciences (Cat. #203806)
  3. 乙醇,无水变性,组织学级,100% 和 95%
  4. 1.5M 盐酸
  5. 孵育缓冲液:将 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) 溶解至 100 mL 1X PBS 中。储存在 4°C。
  6. 建议使用 Anti-Mouse 二抗

B. BrdU 掺入和样本制备

  1. 在新鲜温热的培养基中加入 BrdU,直至最终浓度为 0.03 mg/mL。搁置在一边。
  2. 通过离心分离从试管中采集约 5000 万个细胞,并吸干上清液。
  3. 将 2 ml 含 BrdU 的培养基添加至细胞沉淀物中,涡旋振荡后在 37°C 下孵育 30 分钟。
  4. 通过离心分离使细胞成团并吸干培养基。
  5. 将 2 ml 冷却的 70% 乙醇添加至细胞沉淀物中并且混合均匀。
  6. 室温下固定细胞 5 分钟。
  7. 加入 2–3 ml PBS,并通过离心分离润洗三次。
  8. 加入 1.5 M HCL 后在室温下孵育 30 分钟。
  9. 加入 2–3 ml PBS 后通过离心分离润洗两次。
  10. 继续进行免疫染色 C 部分。

C. 免疫染色

注意:对于单克隆抗体,使用同型匹配的对照组;对于多克隆抗体,使用物种匹配的 IgG。使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

  1. 分装 0.5–1 x 106 细胞到每个测定管中(根据容量)。
  2. 添加 2-3 ml 孵育缓冲液至每根试管,随后通过离心分离润洗。重复操作。
  3. ​在每个测试管中加入100 μl 孵育缓冲液重悬细胞。
  4. 在室温下封闭在孵育缓冲液中 10 分钟。
  5. 向测试管加入适当稀释度的非偶联的一抗(参阅抗体数据表了解合适的稀释度)。
  6. 在室温下孵育一小时。
  7. 按照前述说明,通过离心分离在孵育缓冲液冲洗。
  8. 在荧光染料标记的二抗中重悬细胞,并按照制造商建议的稀释度在孵育缓冲液中稀释。
  9. 在室温孵育 30 分钟。
  10. 按照前述说明,通过离心分离在孵育缓冲液冲洗。
  11. 在 0.5 ml PBS 中重悬细胞,并用流式细胞分析仪进行分析;或者继续步骤 D1 进行 DNA 染色。

D. 可选的 DNA 染色

  1. 在 0.5 ml DNA 染料中重悬细胞(如 DRAQ5® #4084)。
  2. 在室温下孵育至少 5 分钟。
  3. 用流式细胞分析仪分析 DNA 染色的细胞。

发布​于 2009 年 12 月 

实验步骤编号:30

特异性/敏感性

BrdU (Bu20a) Mouse mAb (PE Conjugate) 可检测掺入到单链 DNA 中的 BrdU。DNA 必须经过变性,才能让表位暴露并且能让抗体识别到。

物种反应性:

预期的所有物种

来源/纯化

使用与 BSA 结合的 BrdU 使动物免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

卤化核苷酸如嘧啶类似物溴脱氧尿苷 (BrdU) 对活细胞和组织中新生的DNA进行标记是有用的。BrdU 可代替胸苷掺入复制到 DNA 中,随后使用特异性单克隆抗体对 BrdU 进行免疫检测,以在细胞周期 S 期中对细胞进行标记。在利用溴脱氧尿苷对细胞或组织进行脉冲标记后,BrdU (Bu20a) Mouse mAb 可用于检测掺入单链 DNA 的 BrdU。请查看我们的详细流程以便了解与各种免疫检测应用的标记程序和双链 DNA 变性有关的信息 (1-4)。

  1. Darzynkiewicz, Z. and Juan, G. (2001) Curr Protoc Cytom Chapter 7, Unit 7.7.
  2. Leif, R.C. et al. (2004) Cytometry A 58, 45-52.
  3. Staszkiewicz, J. et al. (2009) Biochem Biophys Res Commun 378, 539-44.
  4. Rothaeusler, K. and Baumgarth, N. (2007) Curr Protoc Cytom Chapter 7, Unit7.31.
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
DRAQ5 是 Biostatus Limited 的注册商标。

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