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72209
Brachyury (D2Z3J) Rabbit mAb (PE Conjugate)
偶联抗体

Brachyury (D2Z3J) Rabbit mAb (PE Conjugate) #72209

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筛选器:
  1. F

以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (PE Conjugate) #5742(虚线)作为对照,使用 Brachyury (D2Z3J) Rabbit mAb (PE Conjugate)(实线)对 HeLa 细胞(蓝色)和 MUG-Chor1 细胞(绿色)进行流式细胞分析。

购买 # 72209S
产品货号 规格 价格 库存
72209S
100 µl (50 次测试)

支持数据

反应性 H
敏感性 内源性
MW (kDa)
同型 兔 IgG

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合藻红蛋白 (PE),并可对人细胞进行直接的流式细胞分析内部检测。该抗体显示的物种交叉反应性预计与非偶联的 Brachyury (D2Z3J) Rabbit mAb #81694 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
流式细胞术 1:50

存储:

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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用于检测转录因子的流式细胞术方案

A. 溶液和试剂

注意:用反渗透去离子 (RODI) 水或等效纯净水制备溶液。

  1. 20X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS):(#9808),要制备 1 L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 到 950 ml dH2O 中,混合均匀。
  2. 甲醛(无甲醇)。
  3. 2% 甲醛(在 PBS 中稀释的甲醛原液;在实验当天新鲜制备)。
  4. Triton™ X-100
  5. 孵育缓冲液:将 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 溶解到 100 ml 1X PBS 中。储存在 4°C。

B. 固定

注意:按照制造商的要求,应在固定/透化前对活细胞进行表面抗原免疫染色。

  1. 在每个测试管中,将含有 1–2 x 106 个细胞的新鲜分离的细胞悬浮液调整至 100 μl 孵育缓冲液。
  2. 按照制造商建议的容量或浓度添加表面抗原抗体到测试管中,随后放在冰上孵育 30 分钟。
  3. 添加 2 ml 孵育缓冲液后,通过离心分离进行洗涤。
  4. 抽吸上清液后,重悬在 500 μl 的 2% 甲醛中。
  5. 在室温下固定 15 分钟。
  6. 用孵育缓冲液离心洗涤 2 次。

C. 通透

  1. 向细胞团添加 1ml 0.1% Triton™ X-100(在 PBS 中按体积分数计量)。
  2. 重悬并在室温下静置 30 分钟。
  3. 用孵育缓冲液离心洗涤 2 次。

D. 免疫染色

  1. 在 100 μl 抗体工作液中重悬细胞团,稀释于孵育缓冲液中,稀释度按照抗体说明书或产品网页说明。
  2. 室温孵育 1 小时。
  3. 用孵育缓冲液离心洗涤 2 次。
  4. 如果使用荧光染料标记的一抗,则在 350 μl 孵育缓冲液中重悬细胞,并使用流式细胞分析仪进行分析;对于未标记或生物素化的一抗,则继续执行步骤 5。
  5. 在荧光染料标记的二抗中重悬细胞,并按照制造商建议的稀释度在孵育缓冲液中稀释。
  6. 室温孵育 30 分钟。
  7. 用孵育缓冲液离心洗涤 2 次。
  8. 在 350 μl 孵育缓冲液中重悬细胞,并使用流式细胞术进行分析。

发布​于 2013 年 12 月 

实验步骤编号:626

特异性/敏感性

Brachyury (D2Z3J) Rabbit mAb (PE Conjugate) 可检测 Brachyury 总蛋白的内源水平。

物种反应性:

来源/纯化

使用与人短尾蛋白 Pro256 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

T 基因编码的短尾蛋白是一种转录因子,对脊椎动物胚胎形成期间的后中胚层形成和轴向发育至关重要 (1)。在小鼠中,短尾蛋白是原肠胚形成期间中胚层形态发生细胞运动所必需的。短尾蛋白突变小鼠会在子宫内死亡并且显示中胚层形成缺陷,包括脊索异常、后体节丢失和尿囊缩减 (2)。人短尾蛋白在脊索以及在沿着脊柱出现的脊索瘤中表达,这使其成为脊索和脊索衍生肿瘤的良好标记物 (3,4)。也已证实常见的人 T 基因多态性与多因子神经管缺陷(脊柱裂)的发育有关 (5,6)。

  1. Edwards, Y.H. et al. (1996) Genome Res 6, 226-33.
  2. Wilson, V. et al. (1995) Development 121, 877-86.
  3. Vujovic, S. et al. (2006) J Pathol 209, 157-65.
  4. Yang, X.R. et al. (2009) Nat Genet 41, 1176-8.
  5. Morrison, K. et al. (1996) Hum Mol Genet 5, 669-74.
  6. Jensen, L.E. et al. (2004) Hum Genet 115, 475-82.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。

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