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35363
β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate)
偶联抗体

β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate) #35363

Citations (0)
筛选器:
  1. IF

对过表达突变型人 APP695 的小鼠 Tg2576 脑细胞进行共聚焦免疫荧光分析。切片用 ASC/TMS1 (D2W8U) 兔单克隆抗体 (特定小鼠) (Alexa Fluor® 488 偶联物) #17507(绿色)、β-淀粉样蛋白 (D54D2) XP® 兔单克隆抗体 (Alexa Fluor® 594 偶联物)(黄色)和 GFAP (GA5) 小鼠单克隆抗体 (Alexa Fluor® 647 偶联物) #3657(红色)标记。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。

购买 # 35363S
产品货号 规格 价格 库存
35363S
100 µl(50 次检测)

支持数据

反应性 H
敏感性 内源性
MW (kDa)
同型 兔 IgG

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体偶联 Alexa Fluor® 594荧光染料,并在内部进行了直接的免疫荧光分析测试。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb #8243 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(冰冻) 1:100

存储:

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(冰冻)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 样品制备 - 冰冻/恒冷箱切片 (IF-F)

  1. 冰冻固定组织进行免疫染色(C 部分)。
  2. 对新鲜未固定的冰冻组织,请立刻按下列步骤固定:
    1. 切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。

      注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用。

    2. 室温下固定切片 15 分钟。
    3. 吸干液体后用 1X PBS 冲洗三次,每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时,按照说明书中推荐的稀释比例,在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​于 2006 年 11 月 

修订于 2013 年 11 月

实验步骤编号:222

特异性/敏感性

β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate) 可识别内源水平的总 β-淀粉样肽 (Aβ)。该抗体检出 Aβ 的几种同工型,如 Aβ-37、Aβ-38、Aβ-39、Aβ-40 和 Aβ-42。本品可在小鼠模型中检测到转基因表达的人 APP。

物种反应性:

来源/纯化

通过采用与人 β-淀粉样肽 (Aβ) 的氨基末端附近的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

β 淀粉样蛋白 (Aβ) 前体蛋白 (APP) 是一种 100-140 kDa 跨膜糖蛋白,拥有多个同工型 (1)。APP 的氨基酸序列中所包含的淀粉样蛋白结构域能够通过两步蛋白剪切反应得到释放 (1)。释出的 A-β 片段在细胞外沉积积累,形成阿尔茨海默病中淀粉样斑块中主要的组分 (1)。APP 可在多个位点被磷酸化,这会影响蛋白本身的裂解加工和分泌过程 (2-5)。周期素依赖性激酶在 Thr668(APP695 同工型对应的位点)的磷酸化依赖于细胞周期,并在 G2/M 期达到峰值 (4)。在 Thr668 位点被磷酸化的 APP 存在于成年大鼠大脑中,且与培养的神经细胞的分化有关 (5,6)。

  1. Selkoe, D.J. (1996) J Biol Chem 271, 18295-8.
  2. Caporaso, G.L. et al. (1992) Proc Natl Acad Sci U S A 89, 3055-9.
  3. Hung, A.Y. and Selkoe, D.J. (1994) EMBO J 13, 534-42.
  4. Suzuki, T. et al. (1994) EMBO J 13, 1114-22.
  5. Ando, K. et al. (1999) J Neurosci 19, 4421-7.
  6. Iijima, K. et al. (2000) J Neurochem 75, 1085-91.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
ProLong 是 Life Technologies 公司的注册商标。
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