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β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)

β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #51374

应用

反应性 敏感性 MW (kDa) 同型
H 内源性 兔 IgG
IF-F

使用 β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)(绿色)和 GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate) #8152(红色),对大于 12 个月的野生型(上图)或 Tg2576(下图)小鼠的脑切片进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

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免疫荧光法(冰冻)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 样品制备 -冰冻/恒冷箱切片 (IF-F)

  1. 冰冻固定组织进行免疫染色(C 部分)。
  2. 对新鲜未固定的冰冻组织,请立刻按下列步骤固定:
    1. 切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。

      注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用。

    2. 室温下固定切片 15 分钟。
    3. 吸干液体后用 1X PBS 冲洗三次,每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时,按照说明书中推荐的稀释比例,在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​于 2006 年 11 月 

修订于 2013 年 11 月

实验步骤编号:222

应用 稀释度
免疫荧光法(冰冻) 1:50
存储:

保存在 PBS (pH 为 7.2 )、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 可识别内源水平的总 β-淀粉样肽 (Aβ)。该抗体检出 Aβ 的几种同工型,如 Aβ-37、Aβ-38、Aβ-39、Aβ-40 和 Aβ-42。本品可在小鼠模型中检测到转基因表达的人 APP。

物种反应性:

通过采用与人 β-淀粉样肽 (Aβ) 的氨基末端附近的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合 Alexa Fluor® 488荧光染料,并对小鼠细胞进行了直接的免疫荧光分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb #8243 相同。

β 淀粉样蛋白 (Aβ) 前体蛋白 (APP) 是一种 100-140 kDa 跨膜糖蛋白,拥有多个同工型 (1)。APP 的氨基酸序列中所包含的淀粉样蛋白结构域能够通过两步蛋白剪切反应得到释放 (1)。释出的 A-β 片段在细胞外沉积积累,形成阿尔茨海默病中淀粉样斑块中主要的组分 (1)。APP 可在多个位点被磷酸化,这会影响蛋白本身的裂解加工和分泌过程 (2-5)。周期素依赖性激酶在 Thr668(APP695 同工型对应的位点)的磷酸化依赖于细胞周期,并在 G2/M 期达到峰值 (4)。在 Thr668 位点被磷酸化的 APP 存在于成年大鼠大脑中,且与培养的神经细胞的分化有关 (5,6)。

  1. Selkoe, D.J. (1996) J Biol Chem 271, 18295-8.
  2. Caporaso, G.L. et al. (1992) Proc Natl Acad Sci USA 89, 3055-9.
  3. Hung, A.Y. and Selkoe, D.J. (1994) EMBO J 13, 534-42.
  4. Suzuki, T. et al. (1994) EMBO J 13, 1114-22.
  5. Ando, K. et al. (1999) J Neurosci 19, 4421-7.
  6. Iijima, K. et al. (2000) J Neurochem 75, 1085-91.
Entrez-Gene Id
351
Swiss-Prot Acc.
P05067
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
Alexa Fluor 是 Life Technologies 公司的注册商标。
DRAQ5 是 Biostatus Limited 的注册商标。
本产品中的 Alexa Fluor 染料接合物已获得 Life Technologies Corporation 的许可销售,仅供研究使用,不可与 DNA 微阵列和高内涵筛选 (HCS) 合并使用。
提供的本品取得了 Life Technologies Corporation 的知识产权许可。本产品的转让条件为买方仅可将购买的产品用于由买方开展的研究,不包括合同研究或任何收取费用的服务研究,买方不得 (1) 将本产品或其组分用于以下目的:(a) 用于诊断、诊疗或预防的目的;(b) 用于检测、分析或筛选服务或获得信息,以按检测收取报酬;或 (c) 用于制造或质量保证或质量控制,和/或 (2) 销售或转让本产品或其组分用于转售,无论是否转售供研究使用。如需了解有关购买本品用于除上述目的之外目的的许可信息,请联系 Life Technologies Corporation(地址:5791Van Allen Way, Carlsbad, CA 92008 USA)或 outlicensing@lifetech.com。

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100 µl (50 次试验)

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赛信通(上海)生物试剂有限公司

上海浦东新区

盛夏路 399 号

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201210​

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