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66297
Arginase-1 (D4E3M™) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
偶联抗体

Arginase-1 (D4E3M™) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #66297

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筛选器:
  1. IF

使用精氨酸-1 (D4E3M™) 兔单克隆抗体 (Alexa Fluor® 647 偶联物)(红色)对小鼠肝脏(阳性;左图)或小肠(阴性;右图)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。

使用 Arginase-1 (D4E3M™) XP® (Alexa Fluor® 488 Conjugate) Rabbit mAb(绿色)对小鼠原代骨髓源性巨噬细胞 (BMDM) 进行共聚焦免疫荧光分析。使用 M-CSF(20 ng/ml,7 天)对 BMDMs 进行分化,并使用 IL-4/cAMP(20 ng/ml、0.5 mM、24 小时;左图)或 LPS/IFNγ(50 ng/ml、20 ng/ml、24 小时;右图)对其进行激活。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

购买 # 66297S
产品货号 规格 价格 库存
66297S
100 µl (50 次测试)

支持数据

反应性 H M R
敏感性 内源性
MW (kDa)
同型 兔 IgG

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合 Alexa Fluor® 488 荧光染料,并可对人体细胞进行直接的流式细胞分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 Arginase-1 (D4E3M™) XP® Rabbit mAb #93668 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(冰冻) 1:100
免疫荧光法(免疫细胞化学) 1:400

存储:

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(冰冻)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 样品制备 - 冰冻/恒冷箱切片 (IF-F)

  1. 冰冻固定组织进行免疫染色(C 部分)。
  2. 对新鲜未固定的冰冻组织,请立刻按下列步骤固定:
    1. 切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。

      注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用。

    2. 室温下固定切片 15 分钟。
    3. 吸干液体后用 1X PBS 冲洗三次,每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时,按照说明书中推荐的稀释比例,在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​于 2006 年 11 月 

修订于 2013 年 11 月

实验步骤编号:222

免疫荧光法(免疫细胞化学)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。

    注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。

  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸干固定液,用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时,按照说明书中推荐的稀释比例,在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​于 2006 年 11 月 

修订于 2013 年 11 月

实验步骤编号:182

特异性/敏感性

Arginase-1 (D4E3M™) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 可识别内源水平的精氨酸酶-1 总蛋白。该抗体不会与精氨酸酶-2 发生交叉反应。

物种反应性:

人, 小鼠, 大鼠

来源/纯化

使用与人精氨酸酶-1 蛋白的 Val47 周围残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

L-精氨酸在调节免疫系统方面发挥关键作用 (1-3)。在炎症、癌症和某些其他病理状况下,骨髓细胞分化被抑制,导致出现不成熟的骨髓细胞异质群体,称为骨髓源性抑制细胞 (MDSCs)。MDSCs 被募集至癌症相关炎症的位点,并表达高水平的精氨酸酶-1 (4)。精氨酸酶-1 催化尿素循环的最后一步,即将 L- 精氨酸转化为 L-鸟氨酸和尿素 (5)。因此,MDSC 可增加 L-精氨酸的分解代谢,导致癌症炎症微环境中 L-精氨酸的耗减 (4,6)。L-精氨酸可用性的降低抑制了 T 细胞的增殖和功能,从而促进了肿瘤进展 (4,6)。精氨酸酶-1 引起了研究人员的极大兴趣,这些研究人员正在寻找治疗靶标以抑制 MDSCs 在癌症免疫治疗中的作用(7)。此外,研究表明,精氨酸酶-1 可将原发性肝细胞癌 (HCC) 与肝脏中的转移性肿瘤区分开来,表明其在 HCC 诊断中可作为潜在生物标记物的价值 (8,9)。

  1. Albina, J.E. et al. (1989) J Exp Med 169, 1021-9.
  2. Mills, C.D. (2001) Crit Rev Immunol 21, 399-425.
  3. Rodriguez, P.C. et al. (2004) Cancer Res 64, 5839-49.
  4. Gabrilovich, D.I. and Nagaraj, S. (2009) Nat Rev Immunol 9, 162-74.
  5. Wu, G. and Morris, S.M. (1998) Biochem J 336 ( Pt 1), 1-17.
  6. Raber, P. et al. (2012) Immunol Invest 41, 614-34.
  7. Wesolowski, R. et al. (2013) J Immunother Cancer 1, 10.
  8. Sang, W. et al. (2015) Tumour Biol 36, 3881-6.
  9. Geramizadeh, B. and Seirfar, N. (2015) Hepat Mon 15, e30336.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
D4E3M 是 Cell Signaling Technology Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
Alexa Fluor 是 Life Technologies 公司的注册商标。
DRAQ5 是 Biostatus Limited 的注册商标。
本产品中的 Alexa Fluor 染料接合物已获得 Life Technologies Corporation 的许可销售,仅供研究使用,不可与 DNA 微阵列和高内涵筛选 (HCS) 合并使用。
提供的本品取得了 Life Technologies Corporation 的知识产权许可。本产品的转让条件为买方仅可将购买的产品用于由买方开展的研究,不包括合同研究或任何收取费用的服务研究,买方不得 (1) 将本产品或其组分用于以下目的:(a) 用于诊断、诊疗或预防的目的;(b) 用于检测、分析或筛选服务或获得信息,以按检测收取报酬;或 (c) 用于制造或质量保证或质量控制,和/或 (2) 销售或转让本产品或其组分用于转售,无论是否转售供研究使用。如需了解有关购买本品用于除上述目的之外目的的许可信息,请联系 Life Technologies Corporation(地址:5791Van Allen Way, Carlsbad, CA 92008 USA)或 outlicensing@lifetech.com。

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