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15002
AML1 (D33G6) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)
偶联抗体

AML1 (D33G6) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate) #15002

应用

反应性 敏感性 MW (kDa) 同型
H Mk 内源性 兔 IgG
流式细胞术

以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (PE Conjugate) #5742(红色)作为对照,使用 AML1 (D33G6) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)(绿色)对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。

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针对需甲醇通透的直标抗体的实验步骤(流式细胞术)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS):(#9808) 要配制 1 L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 到 950 ml dH2O 中,混合均匀。
  2. 16‭‬% 甲醛(无甲醇)
  3. 100% 甲醇
  4. 孵育缓冲液:将 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 溶解于 100 ml 1X PBS 中。储存在 4°C。

B. 固定

注意:如果使用全血,则需在固定前裂解红细胞并通过离心洗涤。

  1. 通过离心收集细胞并吸除上清液。
  2. 在 0.5-1 ml 1 X PBS 中重悬细胞。添加甲醛并使其终浓度为 4% 。
  3. 在室温下固定 15 分钟。
  4. 用足够的 1X PBS 离心洗涤。将上清液丢弃在合适的废液缸中。在 0.5-1 ml 1 X PBS 中重悬细胞。

C. 通透

  1. 通过温和涡旋混合情况下向预冷的细胞中缓慢添加冰冷的 100% 甲醇至 90​% 甲醇的终浓度,以通透细胞。
  2. 在冰上孵育 30 分钟。
  3. 继续进行细胞免疫染色(D 部分)或将细胞储存于 -20°C 的 90% 甲醇中。

D. 免疫染色

  1. 将所需数量的细胞分装进试管或加样孔中。
  2. 通过离心分离,用足够的 1X PBS 洗涤以清除甲醇。将上清液丢弃在合适的废液缸中。如有必要,可重复进行。
  3. 在 100 µl 稀释的直标抗体(按照建议的稀释度在孵育缓冲液中制备)中重悬细胞。
  4. 室温孵育 1 小时。避光保存。
  5. 通过离心分离,用孵育缓冲液洗涤。丢弃上清液。重复操作。
  6. 在 1X PBS 中重悬细胞并用流式细胞分析仪进行分析;或者,如要进行 DNA 染色,那么继续进行可选的 DNA 染色(参见 E 部分)。

E. 可选 DNA 染料

  1. 在 0.5 ml 的 DNA 染料(例如 Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087)中重悬细胞。
  2. 室温孵育至少 5 分钟。
  3. 用流式细胞术分析 DNA 染色液中的细胞。

发布​于 2009 年 7 月 

修订于 2017 年 6 月

实验步骤编号:407

应用 稀释度
流式细胞术 1:50
存储:

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。切勿分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

AML1 (D33G6) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate) 可识别内源水平的 AML1 总蛋白。

物种反应性:

人, 猴

使用与人 AML1 蛋白中氨基末端的氨基酸相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合藻红蛋白 (PE),并可对人体细胞进行了直接的流式细胞术分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 AML1 (D33G6) XP® Rabbit mAb #4336 相同。

AML1 (也叫做 Runx1、CBFA2 或 PEBP2αB)是转录因子核心结合因子 (CBF) 家族中的一员 (1,2)。它对所有造血细胞系的正常发育是必不可少的 (3-5)。AML1 与其伴侣蛋白 CBFβ 形成异二聚体 DNA 结合复合体,并通过结合启动子和增强子元件来调控细胞基因的表达。AML1 在造血相关癌症中经常发生染色体易位,易位类型包括 t(8;21) AML1-ETO、t(12;21) TEL-AML 和 t(8;21) AML-M2 (6)。AML1 磷酸化包括 Ser249 等数个潜在丝氨酸和苏氨酸位点,这是通过 Erk 依赖性方式实现的 (7,8)。

  1. Wang, S. et al. (1993) Mol Cell Biol 13, 3324-39.
  2. Ogawa, E. et al. (1993) Proc Natl Acad Sci U S A 90, 6859-63.
  3. Okuda, T. et al. (1996) Cell 84, 321-30.
  4. Wang, Q. et al. (1996) Proc Natl Acad Sci U S A 93, 3444-9.
  5. North, T.E. et al. (2004) Stem Cells 22, 158-68.
  6. Blyth, K. et al. (2005) Nat Rev Cancer 5, 376-87.
  7. Tanaka, T. et al. (1996) Mol Cell Biol 16, 3967-79.
  8. Zhang, Y. et al. (2004) J Biol Chem 279, 53116-25.
Entrez-Gene Id
861
Swiss-Prot Acc.
Q01196
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
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