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59612
Aiolos (D1C1E) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 700 Conjugate)
偶联抗体

Aiolos (D1C1E) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 700 Conjugate) #59612

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筛选器:
  1. F

使用 Aiolos (D1C1E) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 700 Conjugate)(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Alexa Fluor® 700 Conjugate) #30720(虚线),对 U-937 细胞(蓝色)和 RPMI 8226 细胞(绿色)进行流式细胞分析。

购买 # 59612S
产品货号 规格 价格 库存
59612S
100 µl(50 次检测)

支持数据

反应性 H M
敏感性 内源性
MW (kDa)
同型 兔 IgG

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合 Alexa Fluor® 700 荧光染料,并可对人体细胞进行直接的流式细胞分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 Aiolos (D1C1E) Rabbit mAb #15103 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
流式细胞术 1:50

存储:

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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针对直接偶联抗体的甲醇透化实验步骤(流式细胞术)

A. 溶液和试剂

本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 1X 磷酸盐缓冲液 (PBS):要制备 1 L 1X PBS:添加 100 ml 10X PBS (#12528) 到 900 ml 水中混合。
  2. 4% 甲醛,不含甲醇 (#47746)
  3. 100% 甲醇 (#13604):用前冷却
  4. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来制备 0.5 % BSA PBS 缓冲液。储存在 4°C。

注意:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活性染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com/flowdyes,了解经流式细胞术验证的细胞染料列表。

B. 固定

:固定前,应分离黏附细胞或组织,并放在单细胞悬浮液中。

注意:理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。

注意:如果使用全血,则需在固定前裂解红细胞并通过离心洗涤。

注意:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程中,这类抗体保持结合目的靶标。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。

  1. 进行离心使细胞沉淀,并去除上清液。
  2. 按每 100 万个细胞大约 100 µl 4% 甲醛的密度重悬细胞。混匀以解离沉淀物,并阻止个别细胞出现交联。
  3. 在室温 (20-25°C) 下固定 15 分钟。
  4. 用足够的 1X PBS 离心洗涤。将上清液丢弃在合适的废液缸中。在 0.5-1 ml 1 X PBS 中重悬细胞。继续进行通透步骤。
    1. 或者,细胞可放在 1X PBS 中保存在 4°C 下过夜。

C. 通透

  1. 通过温和涡旋混合情况下向预冷的细胞中缓慢添加冰冷的 100% 甲醇至 90​% 甲醇的终浓度,以通透细胞。
  2. 在冰上通透至少 10 分钟。
  3. 继续进行细胞免疫染色(D 部分)或将细胞储存于 -20°C 的 90% 甲醇中。

D. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

  1. 将所需数量的细胞分装进试管或加样孔中。(通常,每次实验 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心分离,用足够的 1X PBS 洗涤以清除甲醇。将上清液丢弃在合适的废液缸中。如有必要,可重复进行。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,稀释的一抗按建议的稀释度或根据滴定确定用抗体稀释缓冲液制备。
  4. 室温孵育 1 小时。避光保存。
  5. 用抗体稀释缓冲液或 1X PBS 进行离心洗涤。丢弃上清液。重复操作。
  6. 在 200-500 µl 1X PBS 中重悬细胞,并在流式细胞分析仪上进行分析。

发布​于 2009 年 7 月 

修订于 2019 年 8 月

实验步骤编号:407

特异性/敏感性

Aiolos (D1C1E) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 700 Conjugate) 可识别内源水平的 Aiolos 总蛋白。

物种反应性:

人, 小鼠

来源/纯化

使用与人 Aiolos 蛋白 Pro46 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

Aiolos 是一种 Ikaros 家族转录因子,包含多种锌指结构,这些结构可介导 DNA 结合以及与其他 Ikaros 家族成员发生的同源二聚化或异源二聚化 (1)。通过可编码氨基末端锌指结构的部分转录基因所发生的选择性剪切来可产生多种 Aiolos 同工型 (2)。Aiolos 在淋巴组织中表达,其在成熟 B 和 T 细胞中的表达水平最高 (1)。Ikaros 家族蛋白通过将染色质重塑复合体募集到 DNA 来控制淋巴细胞发育 (3)。Aiolos 缺失小鼠的 B 细胞激活阈值降低,增殖增强并且 IgG 和 IgE 水平升高。此外,Aiolos 缺陷型小鼠会出现 B 细胞淋巴瘤 (4)。在 T 细胞中,Aiolos 可通过抑制 IL-2 表达促进 Th17 细胞分化 (5)。Aiolos 在转化上皮细胞中的异常表达会通过下调黏附相关基因而促进锚定非依赖性 (6)。在周围的单倍体急性淋巴细胞性白血病中可观察到 Aiolos 基因表达改变,并且包含 Aiolos 的基因位点与类风湿关节炎和系统性红斑狼疮的易感性增加有关 (7-9)。

  1. Morgan, B. et al. (1997) EMBO J 16, 2004-13.
  2. Liippo, J. et al. (2001) Eur J Immunol 31, 3469-74.
  3. Kim, J. et al. (1999) Immunity 10, 345-55.
  4. Wang, J.H. et al. (1998) Immunity 9, 543-53.
  5. Quintana, F.J. et al. (2012) Nat Immunol 13, 770-7.
  6. Li, X. et al. (2014) Cancer Cell 25, 575-89.
  7. Holmfeldt, L. et al. (2013) Nat Genet 45, 242-52.
  8. Kurreeman, F.A. et al. (2012) Am J Hum Genet 90, 524-32.
  9. Lessard, C.J. et al. (2012) Am J Hum Genet 90, 648-60.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
Alexa Fluor 是 Life Technologies 公司的注册商标。
本产品中的 Alexa Fluor 染料接合物已获得 Life Technologies Corporation 的许可销售,仅供研究使用,不可与 DNA 微阵列和高内涵筛选 (HCS) 合并使用。
提供的本品取得了 Life Technologies Corporation 的知识产权许可。本产品的转让条件为买方仅可将购买的产品用于由买方开展的研究,不包括合同研究或任何收取费用的服务研究,买方不得 (1) 将本产品或其组分用于以下目的:(a) 用于诊断、诊疗或预防的目的;(b) 用于检测、分析或筛选服务或获得信息,以按检测收取报酬;或 (c) 用于制造或质量保证或质量控制,和/或 (2) 销售或转让本产品或其组分用于转售,无论是否转售供研究使用。如需了解有关购买本品用于除上述目的之外目的的许可信息,请联系 Life Technologies Corporation(地址:5791Van Allen Way, Carlsbad, CA 92008 USA)或 outlicensing@lifetech.com。

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