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Aiolos (D1C1E) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)

Aiolos (D1C1E) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #10896

应用

反应性 敏感性 MW (kDa) 同型
H M 内源性 兔 IgG
流式细胞术

使用 Aiolos (D1C1E) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) 对 U-937 细胞(蓝色)和 RPMI-8226 细胞(绿色)进行流式细胞分析。

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针对需甲醇通透的直标抗体的实验步骤(流式细胞术)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS):(#9808) 要配制 1 L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 到 950 ml dH2O 中,混合均匀。
  2. 16‭‬% 甲醛(无甲醇)
  3. 100% 甲醇
  4. 孵育缓冲液:将 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 溶解于 100 ml 1X PBS 中。储存在 4°C。

B. 固定

注意:如果使用全血,则需在固定前裂解红细胞并通过离心洗涤。

  1. 通过离心收集细胞并吸除上清液。
  2. 在 0.5-1 ml 1 X PBS 中重悬细胞。添加甲醛并使其终浓度为 4% 。
  3. 在室温下固定 15 分钟。
  4. 用足够的 1X PBS 离心洗涤。将上清液丢弃在合适的废液缸中。在 0.5-1 ml 1 X PBS 中重悬细胞。

C. 通透

  1. 通过温和涡旋混合情况下向预冷的细胞中缓慢添加冰冷的 100% 甲醇至 90​% 甲醇的终浓度,以通透细胞。
  2. 在冰上孵育 30 分钟。
  3. 继续进行细胞免疫染色(D 部分)或将细胞储存于 -20°C 的 90% 甲醇中。

D. 免疫染色

  1. 将所需数量的细胞分装进试管或加样孔中。
  2. 通过离心分离,用足够的 1X PBS 洗涤以清除甲醇。将上清液丢弃在合适的废液缸中。如有必要,可重复进行。
  3. 在 100 µl 稀释的直标抗体(按照建议的稀释度在孵育缓冲液中制备)中重悬细胞。
  4. 室温孵育 1 小时。避光保存。
  5. 通过离心分离,用孵育缓冲液洗涤。丢弃上清液。重复操作。
  6. 在 1X PBS 中重悬细胞并用流式细胞分析仪进行分析;或者,如要进行 DNA 染色,那么继续进行可选的 DNA 染色(参见 E 部分)。

E. 可选 DNA 染料

  1. 在 0.5 ml 的 DNA 染料(例如 Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087)中重悬细胞。
  2. 室温孵育至少 5 分钟。
  3. 用流式细胞术分析 DNA 染色液中的细胞。

发布​于 2009 年 7 月 

修订于 2017 年 6 月

实验步骤编号:407

应用 稀释度
流式细胞术 1:50
存储:

保存在 PBS (pH 为 7.2 )、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

Aiolos (D1C1E) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) 可识别内源水平的 Aiolos 总蛋白。

物种反应性:

人,小鼠

使用与人 Aiolos 蛋白 Pro46 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合 Alexa Fluor® 647荧光染料,并可对人体细胞进行直接的流式细胞分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 Aiolos (D1C1E) Rabbit mAb #15103 相同。

Aiolos 是一种 Ikaros 家族转录因子,包含多种锌指结构,这些结构可介导 DNA 结合以及与其他 Ikaros 家族成员发生的同源二聚化或异源二聚化 (1)。通过可编码氨基末端锌指结构的部分转录基因所发生的选择性剪切来可产生多种 Aiolos 同工型 (2)。Aiolos 在淋巴组织中表达,其在成熟 B 和 T 细胞中的表达水平最高 (1)。Ikaros 家族蛋白通过将染色质重塑复合体募集到 DNA 来控制淋巴细胞发育 (3)。Aiolos 缺失小鼠的 B 细胞激活阈值降低,增殖增强并且 IgG 和 IgE 水平升高。此外,Aiolos 缺陷型小鼠会出现 B 细胞淋巴瘤 (4)。在 T 细胞中,Aiolos 可通过抑制 IL-2 表达促进 Th17 细胞分化 (5)。Aiolos 在转化上皮细胞中的异常表达会通过下调黏附相关基因而促进锚定非依赖性 (6)。在周围的单倍体急性淋巴细胞性白血病中可观察到 Aiolos 基因表达改变,并且包含 Aiolos 的基因位点与类风湿关节炎和系统性红斑狼疮的易感性增加有关 (7-9)。

  1. Morgan, B. et al. (1997) EMBO J 16, 2004-13.
  2. Liippo, J. et al. (2001) Eur J Immunol 31, 3469-74.
  3. Kim, J. et al. (1999) Immunity 10, 345-55.
  4. Wang, J.H. et al. (1998) Immunity 9, 543-53.
  5. Quintana, F.J. et al. (2012) Nat Immunol 13, 770-7.
  6. Li, X. et al. (2014) Cancer Cell 25, 575-89.
  7. Holmfeldt, L. et al. (2013) Nat Genet 45, 242-52.
  8. Kurreeman, F.A. et al. (2012) Am J Hum Genet 90, 524-32.
  9. Lessard, C.J. et al. (2012) Am J Hum Genet 90, 648-60.
Entrez-Gene Id
22806
Swiss-Prot Acc.
Q9UKT9
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
Alexa Fluor 是 Life Technologies 公司的注册商标。
本产品中的 Alexa Fluor 染料接合物已获得 Life Technologies Corporation 的许可销售,仅供研究使用,不可与 DNA 微阵列和高内涵筛选 (HCS) 合并使用。

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