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60839
α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)
偶联抗体

α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #60839

应用

反应性 敏感性 MW (kDa) 同型
H M R 内源性 兔 IgG
IF-F

使用 α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® 兔单抗(Alexa Fluor® 555偶联物)(红色)对小鼠小肠(左图)和骨骼肌细胞(右图)进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DyLight™488 Phalloidin #12935(绿色)标记。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。

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免疫荧光法(冰冻)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 样品制备 - 冰冻/恒冷箱切片 (IF-F)

  1. 冰冻固定组织进行免疫染色(C 部分)。
  2. 对新鲜未固定的冰冻组织,请立刻按下列步骤固定:
    1. 切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。

      注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用。

    2. 室温下固定切片 15 分钟。
    3. 吸干液体后用 1X PBS 冲洗三次,每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时,按照说明书中推荐的稀释比例,在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​于 2006 年 11 月 

修订于 2013 年 11 月

实验步骤编号:222

应用 稀释度
免疫荧光法(冰冻) 1:50
存储:

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。不要分装抗体,避光保存,切勿冷冻。

α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® 兔单抗(Alexa Fluor® 555偶联物)可检测总 α-平滑肌肌动蛋白的内源水平。

物种反应性:

人, 小鼠, 大鼠

使用与人 α-平滑肌肌动蛋白中氨基末端周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

Cell Signaling Technology 的这种抗体偶联 Alexa Fluor® 555 荧光染料,并在内部对小鼠组织进行了直接的免疫荧光分析检测。该抗体显示的物种交叉反应性预计与非偶联的 α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb #19245 相同。

肌动蛋白是真核生物细胞骨架的一个主要成分。至少已发现六种脊椎动物肌动蛋白同工型。细胞浆 β 和 γ 肌动蛋白质是指“非肌肉”肌动蛋白质,因为它们主要在非肌肉细胞中表达,并且在非肌肉细胞中控制细胞结构和能动性 (1)。α 心脏和 α 骨骼肌动蛋白质分别在心脏横纹肌和骨骼横纹肌中表达。平滑肌 α 和 γ 肌动蛋白质主要分别存在于血管平滑肌和肠道平滑肌中。α 平滑肌肌动蛋白 (ACTA2) 也称为大动脉平滑肌肌动蛋白。这些肌蛋白同工型可调节肌肉细胞收缩能力 (1)。

  1. Herman, I.M. (1993) Curr Opin Cell Biol 5, 48-55.
Entrez-Gene Id
59
Swiss-Prot Acc.
P62736
仅供研究使用。不得用于诊断流程。

Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
DyLight 是 Thermo Fisher Scientific, Inc. 及其子公司的注册商标。
ProLong 是 Life Technologies 公司的注册商标。
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